中药木鳖子抗肿瘤物质基础研究

论文摘要

木鳖子是葫芦科植物木鳖的干燥成熟种子,木鳖子的单味和复方制剂已经在临床上得到广泛应用并显示了明显的疗效。尤其值得一提的是人们利用其散结消肿、攻毒疗疮的作用,将木鳖子运用在抗肿瘤复方中。虽然木鳖子在抗肿瘤复方制剂中作为君药在药方中占据了核心地位,但是其物质基础的研究至今少见报道,因此寻找木鳖子药效的活性成分,确认其物质基础,有助于进一步评价药效、探索其作用机制。本文首先对木鳖子进行抗肿瘤活性筛选,进而对其抗肿瘤的物质基础进行探索和研究。现将本研究简单归纳为以下几个方面的工作：第一章为木鳖子提取液的制备和纯化,包括两部分：第一部分是木鳖子的提取；第二部分用半制备高效液相色谱法对木鳖子提取液进行分离纯化。把木鳖子粗提物（F）分成三个不同的部位（F1、F2、F3）。第二章为体外抗肿瘤活性筛选,以人胃癌细胞SGC7901、人肺癌细胞H1299、人肺癌细胞A549、人前列腺癌细胞PC-3和小鼠结肠癌CT-26等为细胞模型,用MTT法分别测定F、F1、F2和F3对肿瘤细胞的生长抑制作用,考察抗肿瘤活性。结果显示各部分对肿瘤细胞具有不同程度的活性作用,其中F3最为显著。第三章对F1和F3进行成分分析,包括两部分：第一部分建立了HPLC法测定胰蛋白酶抑制剂活性的方法,并进行方法学验证及酶促反应条件的优化。测定结果显示F1具有明显的胰蛋白酶抑制剂活性。第二部选择体外抗肿瘤活性最明显的F3（木鳖子皂苷）为研究对象进行成分分析。分别采用液质联用法、气相、液相色谱法及核磁共振波谱法等对F3中的多个木鳖子皂苷进行定性分析和结构鉴定。通过液质联用检测分析得到皂苷的分子量及碎片信息,并进行结构推测；通过气相和液相色谱两种方法分析鉴别皂苷中的单糖成分和构型；通过氢谱（1H-NMR）、BB-DEPT、HMQC、HMBC、氢-氢相关谱（1H-1HCOSY）和ROESY等对皂苷进行结构解析、归属和鉴定,最终确定皂苷的结构。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 木鳖子的提取及制备
• 引言
• 1. 试剂及仪器
• 2. 木鳖子的提取
• 3. 木鳖子粗提物的制备
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 第二章 木鳖子提取液各个部位抗肿瘤活性研究
• 引言
• 1. 目的
• 2. 材料与方法
• 3. 结果及讨论
• 4. 小结
• 第三章 F1和F3成分分析
• 第一节 F1成分分析
• 引言
• 1. HPLC法测定F1中胰蛋白酶抑制剂方法的建立
• 2. HPLC法测定PNA方法学验证
• 3. 酶促反应条件的优化和讨论
• 4. F1胰蛋白酶抑制剂活性的测定及计算
• 5. F1中胰蛋白酶抑制剂的验证
• 6. 小结
• 第二节 F3成分分析
• 引言
• n法对木鳖子皂苷进行结构推测'>1. LC-MS及LC-（MS）_n法对木鳖子皂苷进行结构推测
• 2. 半制备高效液相色谱法分离制备木鳖子皂苷纯品
• 3. 木鳖子皂苷中单糖组成和构型的测定
• 4. NMR法对木鳖子皂苷进行归属
• 全文总结
• 课题创新之处
• 下一步研究设想
• 参考文献
• 综述: 中药提取分离技术的现状与发展
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的文章
• 致谢