原代培养大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤蛋白质表达谱的变化及意义

论文摘要

目的:研究液压冲击损伤大鼠星形胶质细胞蛋白质表达谱,探寻脑损伤生物标志蛋白。方法:选用出生后24h内SD大鼠（军事医学科学院实验动物中心提供）,取大脑皮质于DMEM-F12培养基中进行星形胶质细胞体外分离培养和纯化,并以胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫细胞化学染色进行鉴定。随机分为对照组和损伤后4h、8h、12h、24h、48h组,复制重度液压冲击损伤模型。台盼蓝染色和PI/Hoechst3342染色观察星形胶质细胞损伤后时序性变化;采用弱阳离子交换芯片（WCX-2）和强阴离子交换芯片（SAX2）结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤后不同时间蛋白质表达谱的改变。结果:1星形胶质细胞的原代培养及纯化纯化传代后,星形胶质细胞形态单一,胞体较大而扁、胞质较丰富、形状不规则;胞突丰富、分支多呈放射状,一级胞突较粗,常有二级分支;胞核圆形或椭圆形,常偏于胞体一侧。2星形胶质细胞的鉴定经GFAP免疫细胞化学染色（SP法）及免疫荧光染色鉴定,阳性细胞计数,星形胶质细胞可达95%以上。3液压冲击损伤后星形胶质细胞形态学变化0.2MPa冲击压力下,细胞明显肿胀,细胞间隙增大,有少量脱壁,死亡细胞数增多;冲击压力达0.8MPa时,大片细胞坏死,失去正常细胞结构,细胞连接断开,成片状脱壁,有些区域只剩下零星单个细胞。PI/Hoechst3342染色可观察到凋亡细胞。4蛋白质芯片检测结果（1）WCX-2芯片共获得688个蛋白质峰;SAX2芯片共获得549个蛋白质峰。在6个组中,WCX-2芯片所捕获的蛋白质数平均较SAX2芯片高出15.9%;此外,WCX-2芯片上捕获的蛋白质总数中,88个（25.3%）蛋白质峰也出现在SAX2芯片上。（2）差异蛋白质:在WCX-2芯片上,损伤后共有17个蛋白质峰的相对强度与对照组相比有显著性差异（P<0.05）;另有135个蛋白质峰在对照组未检到。在SAX2芯片上,损伤后共有15个蛋白质峰的相对强度与对照组相比有显著性差异（P<0.05）,并发现195个蛋白质在对照组未检到。（3）差异蛋白质的时序性变化:与对照组比较,损伤组中有统计学意义的32个蛋白质峰和330个没有出现在对照组的蛋白质峰中,在损伤后各时间点均有分布,其中263个蛋白质峰分布在损伤后12h以内（包括12h）,99个蛋白质峰分布在损伤12h后。在WCX-2芯片上有14个蛋白质峰在两个时间点都可以检测到,其中8258Da在损伤后4h、8h可以检测到;5288Da、5925Da、6939Da在损伤后8h、12h可以检测到;8359Da在损伤后12h、24h可以检测到;6920Da在损伤后4h、24h可以检测到;6550Da在损伤后4h、48h可以检测到;5359Da、6983Da、7146Da、7293Da、8090Da、8503Da、9405Da在损伤后12h、48h可以检测到。在SAX2芯片上有33个蛋白质峰在两个以上时间点都可以检测到,其中5104Da、5203Da、7524Da和8164Da在损伤后4h、8h可以检测到;5925Da、7843Da、8093Da、8194Da、10063Da在损伤后4h、12h可以检测到;4945Da、5360Da、6554Da、7456Da和8930Da在损伤后4h、24h可以检测到;3216Da、4088Da、4675Da、6184Da和6938Da在损伤后4h、48h可以检测到;4812Da在损伤后4h、12h、24h可以检测到;5909Da、7673Da在损伤后4h、12h、48h可以检测到;3694Da在损伤后4h、8h、12h、48h可以检测到;3214Da、3397Da、5758Da和6939Da在损伤后8h、12h可以检测到;4571Da在损伤后8h、24h可以检测到;5205Da、8092Da在损伤后8h、48h可以检测到;4608Da、7202Da在损伤后8h、12h、48h可以检测到;6596Da在损伤后12h、24h、48h可以检测到。（4）液压冲击损伤后表达上调或下调的差异蛋白质:与对照组蛋白质谱相比,损伤后有8个蛋白质表达增高,有24个蛋白质表达降低。结论:1液压冲击损伤可引起皮质星形胶质细胞蛋白质表达谱变化。2在皮质星形胶质细胞中检测到的差异蛋白质以及损伤后新出现的蛋白质峰,可能是脑损伤生物标志蛋白,对其进行进一步研究,有望深入了解脑损伤的分子机制,并用于脑损伤的诊断和治疗。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写
• 研究论文 原代培养大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤蛋白质表达谱的变化及意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 星形胶质细胞神经保护作用及机制
• 致谢
• 个人简历