论文摘要
目的（1）探讨RUNX3在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义。（2）探讨原发性肝癌中RUNX3基因启动子甲基化及mRNA表达水平,并分析其甲基化与临床特征的关系。方法（1）提取样本的总RNA（包括65例手术切除的肝癌组织及其对应的癌旁正常组织和6株肝癌细胞株及1株正常肝细胞株）,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测RUNX3 mRNA的表达水平,进一步通过Western blot验证。（2）收集75例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、10例正常肝组织,运用甲基化特异性PCR（MSP）测定RUNX3基因CpG岛甲基化状态,并采用实时定量PCR分析RUNX3基因在75例原发性肝癌中的表达水平及甲基化与肝癌临床特征的关系。结果（1）对照组（癌旁正常组织）RUNX3 mRNA表达量为肝癌组（癌组织）的4.2倍。其中有41例（63.08%）肝癌组织中的RUNX3 mRNA表达水平比对照组织显著下调:下调8倍以上者17例,下调4倍以上者21例,下调2倍以上者3例。66.67%（4/6）肝癌细胞株RUNX3 mRNA表达水平明显下调。RUNX3在蛋白水平和mRNA水平变化趋势基本一致。在肝癌组织中RUNX3的表达与患者肝硬化与否（P=0.028）及组织分型（P<0.001）有相关。（2）75例肝癌组织中有34例（45.3% ）存在RUNX3基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有7例（9.3% ） ,而正常肝组织中未检测到RUNX3基因CpG岛的异常甲基化,RUNX3基因异常甲基化在肝癌组织、癌旁组织及正常组织中的发生率差异有统计学意（x2=29.18,p<0.001）。在RUNX3 mRNA表达缺失或下调45例肝癌组织中,高达27例（60% ）同时伴随启动子甲基化,RUNX3 mRNA表达下调与RUNX3基因甲基化密切相关（x2=9.77,p<0.002）。肝癌组织非甲基化组RUNX3基因表达量高于甲基化组4倍以上。RUNX3基因CpG岛甲基化与患者肝硬化与否相关（x2=5.07,p<0.024）。结论（1） RUNX3基因的缺失或低表达可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用。（2）原发性肝癌存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化,推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一,并与患者肝硬化密切相关。