小鼠两肾一夹高血压模型的制作及AT1亚型表达的研究

论文摘要

背景自1934年Goldblatt首次通过钳夹狗的双侧肾动脉引起狗的血压升高以来，采用钳夹肾动脉制作高血压模型被越来越多用于心血管疾病的研究，其中最常采用的是两肾一夹（2K1C）技术。现已证实，血管紧张素II（AngII）在2K1C高血压模型血压的发展和维持过程中起重要作用。血管紧张素II受体主要有两个亚型：1型（AT1）和2型（AT2），且已证实AngII主要作用于AT1，产生血管收缩、细胞增殖等作用。小鼠AT1有两个亚型：AT1a和AT1b。研究发现，AT1a在小鼠血压的调节过程中起主要作用，AT1b为血管壁主要表达亚型，并且介导AngII诱导的血管收缩反应。随着转基因及基因敲除技术的发展，小鼠被越来越多的用于心血管疾病的研究，因此成功制作小鼠肾血管性高血压模型显得很有必要。但目前国内主要采用大鼠制作该模型，尚未见采用小鼠的报道，并且高血压对小鼠AT1亚型表达的影响目前仍不清楚。目的我们首先建立小鼠2K1C肾血管性高血压动物模型，并利用该模型研究高血压对小鼠AT1亚型表达的影响，旨在为高血压的基础研究及防治提供一些理论依据。方法本实验研究对象为8周龄至12周龄，体重24g至28g的健康雄性无特定病原体（SPF）级C57BL/6小鼠，由汕头大学医学院实验动物中心提供。取17只小鼠，随机分为假手术组（Sham，8只）和两肾一夹组（2K1C，9只）。2K1C组采用口径为0.12mm U形银夹钳夹右侧肾动脉，Sham组除未在右侧肾动脉套上U形夹外，其余操作完全相同。手术当天计为第0天，尾套法测清醒状态下小鼠收缩压，选取第27天收缩压大于140mmHg的小鼠作为高血压小鼠。术后第28天处死小鼠，称取体重及心脏和双侧肾脏重量，计算心脏和双侧肾脏与体重的比值（mg/g）；采用HE染色法观察小鼠心脏和肾脏病理改变情况；采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和限制性内切酶（EcoRI和HapII）技术分析小鼠心脏、肾脏、肾上腺、下丘脑、垂体、脑干、腹主动脉等部位AT1亚型表达情况；采用血管环张力检测系统检测AngII诱导离体小鼠腹主动脉的收缩反应性。应用SPSS 16.0统计软件进行数据的统计分析。结果1.在实验过程中，Sham组小鼠收缩压维持在101.9±14.4mmHg至114.1±17.1mmHg之间，未见升高，而2K1C组小鼠收缩压呈明显上升趋势，最高收缩压为156.0±17.7mmHg（第23天）。其中第27天，Sham组和2K1C组小鼠收缩压分别是114.1±17.1mmHg和150.9±11.9mmHg。两组对比有高度显著性差异（P <0.01）。2.术后第28天，称取两组小鼠体重无明显差异。与Sham组相比，2K1C组小鼠心脏重量、左侧肾脏重量、心脏与体重之比及左侧肾脏与体重之比均明显增加，而右侧肾脏重量和右侧肾脏与体重之比均明显减小。两组对比有高度显著性差异（P <0.01）。3. 2K1C组右侧肾脏体积较Sham组明显减小。HE染色发现，2K1C组小鼠心肌细胞增粗，右侧肾脏部分肾小球和肾小管出现萎缩，左侧肾脏肾小球出现代偿性肥大，亦发现左侧肾脏内小动脉血管平滑肌细胞排列紊乱，细胞外基质增多。4.采用RT-PCR和限制性内切酶（EcoRI和HapII）技术分析发现，在Sham组和2K1C组小鼠的心脏、肾脏、肾上腺、下丘脑、垂体和脑干组织中，均为AT1a亚型表达占主导地位，两组间未见明显差异。但在Sham组小鼠腹主动脉中是AT1b亚型表达占优，在2K1C组小鼠的腹主动脉中则是AT1a亚型表达占优。5. 10nM AngII诱导Sham组和2K1C组离体小鼠腹主动脉环的收缩反应性分别是49.0±13.8%和25.6±11.2%。两组对比有统计学意义（P <0.05）。结论1.根据小鼠收缩压的升高及心脏和肾脏形态学的改变，表明我们利用C57BL/6小鼠成功建立2K1C肾血管性高血压模型。2.在2K1C高血压模型中，AT1a变成腹主动脉支配性亚型，并且伴随对应的AngII介导的血管收缩反应下降。这表明在高血压的发展过程中，AT1a在血管壁可能扮演与AT1b不同的角色。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 主要试剂和仪 器
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 主要溶液的配制
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 小鼠两肾一夹高血压模型的建立
• 2.3.2 组织取材和保存
• 2.3.3 组织病理切片的制作
• 2.3.4 AT1 亚型表达的分析
• 2.3.5 血管收缩反应性检测
• 2.3.6 数据的统计分析
• 第三章 实验结果
• 3.1 小鼠收缩压的改变
• 3.2 小鼠体重及心脏和肾脏重量
• 3.3 心脏和肾脏形态学
• 3.4 A T1 亚型表达
• 3.5 腹主动脉收缩反应性
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文情况
• 个人简介