论文摘要
观赏凤梨是优良的室内观叶、观花植物,近年来消费量急剧上升,但目前我国优良资源有限,我们通过植物组织培养以及转基因技术来进行种质资源创新。1、共收集观赏凤梨种质资源661份,其中原生种（变种）200余份,其余为商用品种和杂交种。在此基础上,选出了果子蔓属‘纯黄星’（Guzmania ’Diana’）和‘太阳神’（G. ’Focux’）2个品种作为转基因材料。2、通过提取液、提取部位、研磨方法、沉淀时间等多个因素的研究,成功地掌握了高效高质量的观赏凤梨叶片DNA提取方法。3、以果子蔓属‘巨富星’（G.’Tutte Frutte’）的茎尖和叶鞘为外植体,建立了快繁体系。结果表明：茎尖的分化能力比叶鞘强,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA2.0mg／L+NAA0.5mg／L+2,4-D2.0mg／L,诱导分化和增殖的最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg／L+NAA0.5mg／L,生根最佳培养基为Ms液体培养基。4.以‘纯黄星’和‘太阳神’的短缩茎为材料,建立了基因枪介导的pBIN438-GFP遗传转化体系,经PcR检测获得3个阳性株系。经激光共聚焦显微镜下观察,外源基因在转基因植株的细胞核表达。研究表明本实验所建立的基因枪介导转化凤梨体系为凤梨基因工程育种提供了实验基础和理论依据。
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致谢摘要Abstract第一章 文献综述—凤梨的生物技术研究进展1.1 概况1.1.1 凤梨科的基本情况1.1.2 凤梨应用的历史1.2 观赏凤梨的研究进展1.2.1 观赏凤梨育种概况1.2.2 观赏凤梨的离体培养研究进展1.2.2.1 观赏凤梨离体培养体系的建立1.2.2.2 不同外殖体的影响1.2.2.3 培养物褐化的原因以及对策1.2.3 凤梨转基因研究进展1.2.3.1 凤梨遗传转化体系的建立1.2.3.2 凤梨转基因植株筛选方法的改良1.2.3.3 凤梨转基因植株性状测定1.2.3.4 凤梨转基因趋势1.3 国内外花卉基因研究现状和发展趋势1.3.1 花色基因研究1.3.2 花型基因研究1.3.3 花期基因研究1.3.4 抗性基因研究1.4 本论文的研究意义、目的和技术路线1.4.1 研究意义和目的1.4.2 主要研究内容和技术路线第二章 观赏凤梨优质品种收集与筛选2.1 资源的引进与筛选2.3 育种工作第三章 观赏凤梨基因组提取方法优化3.1 材料和方法3.1.1 材料3.1.2 主要试剂及仪器3.1.3 DNA提取方法3.1.4 DNA检测方法3.2 结果与分析3.2.1 提取方法的比较3.2.1.1 不同提取液3.2.1.2 研磨方法3.2.1.3 抽提与沉淀3.2.2 选取材料的差异3.2.2.1 不同品种3.2.2.2 不同植株和不同部位3.2.2.3 选取量的比较3.3 讨论第四章 观赏凤梨组织培养体系的建立4.1 材料和方法4.1.1 材料4.1.2 外殖体的消毒4.1.3 增殖培养基的筛选4.1.4 生根壮苗培养基的筛选4.1.5 凤梨抗生素抗性浓度的筛选4.2 结果与分析4.2.1 不同外殖体的分化4.2.2 不同培养基对‘巨富星’增殖的影响4.2.3 不同培养基对生根的影响4.2.4 抗生素抗性浓度的筛选4.3 讨论第五章 观赏凤梨遗传转化体系的建立和优化5.1 材料和方法5.1.1 植物材料5.1.2 基因5.1.3 基因枪介导的‘纯黄星’、‘太阳神’的遗传转化5.1.3.1 受体的准备5.1.3.2 基因枪介导转化‘纯黄星’、‘太阳神’短缩茎组织5.1.3.3 转化子的筛选5.1.3.4 转基因植株的PCR检测5.1.3.5 转基因植株的电镜检测5.1.4 pBIN438-GFP融合蛋白在洋葱表皮细胞的定位观察5.1.5 pBIN438-GFP在凤梨叶片表皮细胞上瞬时表达的定位观察5.2 结果与分析5.2.1 不同轰击参数下的存活率和增殖率5.2.2 转化植株的抗生素筛选5.2.3 转基因植株的PCR检测5.2.4 pBIN438-GFP融合蛋白在洋葱表皮细胞的细胞膜和细胞核上5.2.5 pBIN438-GFP融合蛋白在凤梨植株叶片细胞上的瞬时表达5.2.6 pBIN438-GFP融合蛋白在‘纯黄星’转化再生植株细胞上的表达5.3 讨论第六章 结论与展望6.1 主要结论6.2 创新点6.3 有待进一步开展的工作参考文献附录缩略词表作者简介
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