论文摘要
目的: 研究细胞因子hTGF-β1对小鼠的淋巴细胞生物学行为的影响,以及hTGF-β1基因修饰的大鼠软骨细胞生物学功能的改变,初步探讨其作用机制。为寻找理想的软骨组织工程种子细胞、并开发新的异种移植排斥治疗和预防方法奠定基础。 方法: 将hTGF-β1细胞因子作用于小鼠淋巴细胞,利用荧光抗体标记及Annexin V和7-AAD双染色,结合流式细胞术检测对多克隆刺激剂作用下的淋巴细胞CD69及CD25表达水平及Annexin V+/7-AAD-细胞比例,判断T细胞的活化与凋亡水平;3H-TdR同位素掺入法检测淋巴细胞的增殖情况。另一方面,利用优化的电穿孔转染技术将pEGFP-TGF-β1-N1表达载体导入大鼠原代培养的软骨细胞中,流式细胞仪检测荧光表达率,荧光显微镜观察荧光表达情况,同位素掺入法检测软骨细胞生物学功能。 结果: 小同剂量hTGF-β1对于多克隆刺激剂作用的小鼠T细胞的活化较对照组均无明显抑制作用;但可以抑制其增殖以及促进活化诱导的淋巴细胞凋亡,并在一定范围内呈剂量依赖关系。流式细胞仪可以检测到成功构建的
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