论文题目: 聚集蛋白基因转染对移植肌肉功能作用的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 整形外科学
作者: 张盈帆
导师: 林子豪,江华,蔡在龙,赵耀忠,吴建明
关键词: 肌肉移植,功能恢复,运动终板,烟碱型乙酰胆碱能受体,亚单位,神经源性聚集蛋白,电转染,基因治疗
文献来源: 第二军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本研究以大鼠为实验对象、自体股薄肌游离移植为实验模型,首先以荧光定量RT-PCR的方法检测肌肉移植后终板区乙酰胆碱能受体（nAChR）γ和ε亚单位基因表达的动态演变,之后以免疫组化和Western杂交的方法定性和定量的研究了肌肉移植后终板区神经源性聚集蛋白（agrin）的分布变化;应用重叠剪切延伸RT-PCR法构建携带神经源性agrin基因片段的表达载体,原代培养了大鼠的成肌细胞,并在体外细胞水平进行了转染实验,通过RT-PCR和双重免疫荧光标记的方法鉴定出具有促进乙酰胆碱能受体簇集生物学活性的神经源性AGRIN-Y4Z8基因克隆（国外学者惠赠）;以此为基础,在体内实验中确定了基因转染的最佳电刺激参数并测定了转染效率,后将携带AGRIN-Y4Z8基因的质粒直接注射入移植肌肉终板区附近并以电击辅助转染,在术后不同时间运用生理学、组织形态学、病理学、分子生物学、神经生物学、免疫学等方法手段,从细胞、生理和分子等不同水平对移植肌肉收缩功能恢复以及运动终板的再生重建情况和进行研究,结果证实: ①肌肉游离移植后,应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测到终板区nAChRε和γ亚单位基因的表达发生动态的变化;终板区神经源性agrin则经历明显减少到缓慢恢复的过程,到术后30周时肌肉内神经源性agrin的表达仍不能恢复到移植前的水平,而这可能是运动终板重建延迟以及重建达不到术前水平的重要影响因素之一,由此间接影响到移植肌肉功能的恢复。 ②构建的神经源性agrin-Y4Z8基因克隆成功转染原代培养的成肌细胞,并能在基因水平转录mRNA,但却不能分泌表达神经源性的agrin蛋白,主要与克隆基因上游缺乏编码信号肽的序列有关;只有转染阳性对照组AGRIN-Y4Z8基因的成肌细胞才能表达分泌有促进nAChR聚集活性的agrin。 ③移植肌肉内电转染1次神经源性agrin基因,最短能在移植术后15周内持续表达agrin;补充神经源性的agrin后,促进了移植肌肉术后早期收缩功能的恢复（4、5、10周）,其机制可能与实验组ε-AChR受体数量的增多和终板结构的完善有关。
论文目录:
缩写对照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 大鼠股薄肌游离移植后终板区乙酰胆碱能受体ε和γ亚单位表达变化及神经源性聚集蛋白的分布规律
实验一、肌肉游离移植后烟碱型乙酰胆碱能受体ε和γ亚单位表达变化及意义
实验二、肌肉游离移植后终板区神经源性agrin的分布变化及意义
第二部分 神经源性agfin基因克隆构建及原代培养成肌细胞的转染
实验一、神经源性agrin基因的克隆及真核表达载体的构建
实验二、大鼠成肌细胞的原代培养及鉴定
实验三、脂质体介导神经源性agfin基因转染成肌细胞及其活性检测
第三部分 游离移植股薄肌内agrin的电转染及术后各项指标观察
实验一、大鼠股薄肌内agrin基因的电转染及效率分析
实验二、电转染神经源性agrin基因促进肌肉移植后早期功能恢复的实验研究
小结
综述
发表论文
致谢
发布时间: 2006-05-08
相关论文
- [1].组织工程化肌及成肌细胞移植的实验研究[D]. 孙天威.四川大学2005
- [2].细胞分化调控对皮肤及其附属结构损伤修复与再生作用的基础研究[D]. 李海红.中国人民解放军军医进修学院2006
- [3].表皮参与瘢痕形成的实验和临床研究[D]. 许明火.中国人民解放军军医进修学院2006
- [4].重组腺病毒载体介导的VEGF165基因增强大鼠TRAM皮瓣存活的实验研究[D]. 王立夫.四川大学2004
- [5].细菌胶原酶对异常瘢痕降解作用的实验研究及临床疗效的初步观察[D]. 程洪伟.中国协和医科大学1997
- [6].自体游离脂肪移植的实验研究和临床观察[D]. 朱晓峰.中国协和医科大学1996
- [7].反流轴型皮瓣成活机理及临床应用研究[D]. 牙祖蒙.中国协和医科大学2000
- [8].带导药系统的新型扩张器加速组织扩张的实验和临床应用研究[D]. 刘文阁.中国协和医科大学1997
- [9].RNA干扰介导蛋白酶体亚基RC2和泛素连接酶MAFbx基因下调延缓失神经骨骼肌萎缩的基础研究[D]. 冯勇.复旦大学2006
- [10].MAFbx/Atrogin-1和MuRF1在大鼠肌肉游离移植模型中的表达和意义[D]. 刘安堂.第二军医大学2007
标签：肌肉移植论文; 功能恢复论文; 运动终板论文; 烟碱型乙酰胆碱能受体论文; 亚单位论文; 神经源性聚集蛋白论文; 电转染论文; 基因治疗论文;