论文摘要
目的:观察老年小鼠连续多次接受氯胺酮麻醉后认知功能及海马区神经细胞凋亡和超微形态学的变化。方法: 12月龄的小鼠24只随机分为对照组(A组)、水合氯醛组(B组)和氯胺酮组(C组),每天1次分别经腹腔注射生理盐水、水合氯醛和氯胺酮,连续7天。采用MORRIS水迷宫系统观察小鼠的学习记忆功能的改变。水迷宫行为学测试后处死小鼠,取双测的海马组织。右侧海马CA1区的组织用于透射电镜观察细胞超微结构和细胞的凋亡情况等形态学改变,左侧海马组织用于Tunel法原位细胞凋亡检测并统计凋亡的细胞数。小鼠认知记忆能力的变化和海马脑区的神经细胞凋亡结果采用统计软件分析比较。结果:1、行为学检测:①定向航行实验:经过4天的定向航行训练,各组的逃避潜伏期均有下降趋势,但程度有所不同。第1天至第4天的结果,C组从54.83±7.35S缩短为47.50±6.76s, A组从56.99±5.42s缩短为29.44±4.95s,B组从53.48±6.88s缩短为28.21±8.78s。第1天和第2天三组小鼠间逃避潜伏期无统计学差异,而第3天和第4天C组与A组和B组间的比较有显著差异(P均<0.05),A组与B组相比则无明显差异(P >0.05)。②空间探索实验:逃避平台穿越次数为C组1.13±1.13次、A组4±2.83次、B组3.5±1.77次;第三象限活动路程(原逃避平台所在的象限)为C组1479.58±747.47mm、A组2752.30±794.41mm、B组2624.13±905.36mm;第三象限活动时间为C组10.86±5.01s、A组21.23±7.72s、B组20.85±6.75s。统计学分析显示,此三项指标C组与A组和B组比较均有显著差异(P均<0.05),而A组和B组之间差别无统计学意义(P >0.05)。三组小鼠60s内活动的总路程虽无差异,但活动轨迹显示A、B两组较有目的性和方向性,而C组较为混乱、无目的性。2、TUNEL法原位细胞凋亡检测:一个200倍放大显微镜视野下凋亡的神经锥体细胞数A组为5.84±3.45个,B组7.19±4.02个,C组18.66±8.61个。C组明显高于A组和B组(P<0.05)。组间LSD两两比较,A和B组间无统计学差异,C组与A组或B组间有显著差异(P <0.05)。3、超微结构:透射电镜下,C组海马区可见神经元细胞体积变小,胞浆破坏崩解,线粒体肿胀、空化;细胞核膜模糊、染色质浓缩并凝结成块,出现染色质沿核膜内侧排列的核边集现象,胞内可见细胞核裂解产生的凋亡小体。而A组和B组海马区神经细胞胞浆内粗面内质网、高尔基体、线粒体等细胞器清晰,细胞突起明显,突触结构清晰;细胞核大,常染色质及核仁均清晰可见。结论:老年小鼠在多次氯胺酮用药单因素作用下海马区神经锥体细胞可发生凋亡且影响了老年小鼠的学习认知功能,而多次水合氯醛麻醉对老年小鼠海马区神经锥体细胞凋亡和学习认知功能无明显影响,表明本实验中老年小鼠的神经系统损伤并非麻醉作用所致,而与氯胺酮的药物特性有关。
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