论文摘要
运用酶学分析方法和组织学技术,研究了水体中不同浓度Cd2+或Cr6+胁迫1d,3d,5d,7d,9d后对拟穴青蟹血细胞总数（THC）、免疫相关酶及鳃、肝胰腺显微结构等的影响,探讨Cd2+或Cr6+胁迫下拟穴青蟹的免疫防御机制,以期为其健康养殖水质管理提供理论指导,并为甲壳动物环境免疫学研究积累基础资料。本试验的主要结果和结论如下:1.Cd2+或Cr6+胁迫对拟穴青蟹血细胞总数（THC）的影响拟穴青蟹分别暴露于不同浓度Cd2+或Cr6+水体中1d,3d,5d,7d,9d后,其血细胞总数（THC）发生了相应的变化,且一定程度上存在时间剂量效应关系。Cd2+或Cr6+胁迫1d后拟穴青蟹THC即显著下降（P<0.05）,变幅与Cd2+或Cr6+浓度呈正相关,且拟穴青蟹对Cd2+的反应较Cr6+更灵敏,Cd2+抑制效应较Cr6+持续性更长。随着胁迫时间延长至9d后,Cr6+胁迫下拟穴青蟹THC可逐渐恢复至与对照组差异不显著的状态（P>0.05）,然而0.075mg/L、0.1 mg/L Cd2+组的拟穴青蟹THC仍被显著抑制（P<0.05）。2.Cd2+或Cr6+胁迫对拟穴青蟹血清中免疫相关酶活性的影响Cd2+或Cr6+胁迫对拟穴青蟹血清中免疫相关酶活性影响显著（P<0.05）。Cd2+或Cr6+胁迫均对拟穴青蟹血清酚氧化酶（PO）活性产生显著抑制效应（P<0.05）,但剂量效应关系不明显。Cr6+处理组的抑制效应1d后即表现出来,且持续时间较短;Cd2+处理组5d后才表现出来,抑制效应持续时间较长。Cd2+或Cr6+暴露对拟穴青蟹血清溶菌酶（UL）活性均具有激活效应,0.075mg/L、0.1 mg/L Cd2+组和4.0 mg/L、8.0 mg/L Cr6+组对溶菌酶激活效应显著（P<0.05）,Cd2+或Cr6+对血清中溶菌酶激活效应存在时间效应关系,随着胁迫时间的延长,其激活效应逐渐减弱。Cd2+或Cr6+胁迫均能对拟穴青蟹血清抗菌力（Ua）产生显著抑制效应（P<0.05）,其中Cr6+的抑制效应强于Cd2+,并表现出时间剂量效应关系。3.Cd2+或Cr6+胁迫对拟穴青蟹组织、器官中免疫相关酶活性的影响Cd2+或Cr6+暴露对拟穴青蟹不同组织、器官中免疫相关酶类活性影响显著。Cd2+暴露1d后即对拟穴青蟹鳃中Ca2+-ATPase活性产生显著抑制效应（P<0.05）,抑制程度与Cd2+浓度相关性不显著（P>0.05）;Cd2+对拟穴青蟹鳃中Na+,K+-ATPase活性的抑制效应相对较弱,Ca2+-ATPase对Cd2+的敏感性较Na+,K+-ATPase强。拟穴青蟹鳃中Ca2+-ATPase、Na+,K+-ATPase活性在Cr6+暴露1d后即被显著抑制（P<0.05）,且发现随胁迫时间的延长Cd2+或Cr6+均可诱导拟穴青蟹鳃中Ca2+-ATPase、Na+,K+-ATPase活性升高。Cd2+暴露可诱导拟穴青蟹血清、鳃、肝胰腺、肌肉中SOD活性显著升高（P<0.05）,其中肝胰腺中SOD反应更灵敏。Cr6+暴露下拟穴青蟹血清、鳃、肝胰腺、肌肉中SOD活性均可被显著诱导升高（P<0.05）,与Cd2+不同的是Cr6+胁迫下鳃中SOD反应较灵敏。Cd2+胁迫可诱导拟穴青蟹鳃、肝胰腺、肌肉中ACP活性显著升高（P<0.05）,但Cr6+胁迫对拟穴青蟹肝胰腺、肌肉中ACP活性影响不显著（P>0.05）。Cd2+胁迫对拟穴青蟹鳃、肝胰腺、肌肉中AKP抑制效应显著（P<0.05）,尤其是肝胰腺、肌肉。与Cd2+处理不同的是,Cr6+处理能刺激拟穴青蟹鳃、肝胰腺、肌肉中AKP活性。4.Cd2+或Cr6+胁迫对拟穴青蟹组织、器官显微结构的影响Cd2+或Cr6+胁迫对拟穴青蟹组织、器官显微结构产生剂量-时间效应。胁迫9d后,其显微结构发生了不同程度的改变。0.1mg/LCd2+暴露9d后,拟穴青蟹鳃叶出现一定程度增厚,血腔相对增大;肝胰腺细胞界限模糊。8.0mg/LCr6+暴露下,鳃叶相对增厚,上皮层破坏;肝胰腺中血细胞增多,肝小管基膜出现断裂,界限模糊。综上所述,Cd2+或Cr6+胁迫对拟穴青蟹主要免疫指标影响显著,可导致机体免疫力下降。