AMPK对产蛋鸡胆固醇代谢的调节作用

论文摘要

要实现人为调控产蛋鸡的脂质代谢，降低鸡蛋胆固醇含量，必须了解产蛋鸡脂类代谢和胆固醇沉积机制。近年来研究发现由一磷酸腺苷（AMP）激活的蛋白激酶（AMP—activated protein kinase，AMPK）在能量代谢特别是在脂质代谢中起着重要作用。AMPK活化可使β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGR）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）等磷酸化而失去活性，从而抑制胆固醇和脂肪酸的合成。由此推测“AMPK可能介导产蛋鸡胆固醇的代谢”。为了初步探讨AMPK是否参与产蛋鸡胆固醇代谢的调控，本研究在建立产蛋鸡肝脏AMPK整体活化模式的基础上，考察AMPK活性变化对产蛋鸡胆固醇代谢、鸡蛋中胆固醇沉积的调节作用及对产蛋鸡内分泌激素的影响；同时研究AMPK是否参与介导调节鸡蛋胆固醇沉积的物质—洛伐他汀的降胆固醇作用。研究包括四个试验：试验一：考察二甲双胍（metformin）是否与AMPK的激活剂—AICAR有相似作用，可作为产蛋鸡肝细胞AMPK的激活剂，为产蛋鸡AMPK整体活化做准备。以产蛋鸡肝细胞为材料，研究添加AICAR和二甲双胍对产蛋鸡肝细胞AMPK、HMGR、ACC和细胞脂质代谢的影响。加入油酸钠为脂质合成底物。采用单因子设计，分为4个处理，分别为基础培养液（对照组），基础培养液加入0.5mmol/LAICAR、0.5mmol/L二甲双胍和1.0mmol/L二甲双胍，培养时间100min。结果表明： 1、二甲双胍具有与AICAR相似的作用，0.5mmol/L、1.0mmol/L二甲双胍组AMPK活性分别较对照组提高37.4％（P＜0.05）和99.2％（P＜0.01）。二甲双胍活化AMPK后，可抑制ACC和HMGR的活性。AMPK与ACC、HMGR活性呈负相关，相关系数分别为-0.696（P=0.01）和-0.317（P=0.162）。 2、加入二甲双胍可抑制产蛋鸡肝细胞甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）的合成，AMPK活性与肝细胞甘油三酯、总胆固醇的合成量呈负相关，相关系数分别为-0.448（P=0.032）和-0.493（P=0.017）。根据本试验结果，二甲双胍能激活产蛋鸡肝细胞AMPK。试验二：考察在日粮中添加二甲双胍（以盐酸二甲双胍形式）能否激活产蛋鸡肝脏AMPK，确定适宜的添加量，为产蛋鸡整体活化肝脏AMPK奠定方法学基础。采用单因子试验设计，试验选用高产新罗曼产蛋鸡40只分为4个处理，即基础日粮组（对照组）、基础日粮中分别添加0.6％、0.8％、1.0％的盐酸二甲双胍（metformin-HCl）。每个处理5个重复，每个重复2只鸡。正式试验期3周。试验结束时每个处理组随机选出5只鸡剖杀，取样测定肝脏AMPK、ACC、HMGR活性及

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缩略语表

前言

第一部分文献综述

1 产蛋鸡胆固醇代谢及营养调控

1.1 降低鸡蛋胆固醇含量的重要性

1.2 产蛋鸡胆固醇的代谢

1.3 调控鸡蛋胆固醇含量的营养途径

2 AMPK与脂质代谢的关系

2.1 AMPK的分子结构和分布特点

2.2 AMPK活性的调控

2.3 AMPK调节脂肪代谢

2.4 AMPK的研究手段

3 AMPK与产蛋鸡胆固醇代谢的可能关系

4 存在问题、本研究的目的、内容、意义和技术路线

4.1 存在问题

4.2 研究目的

4.3 研究内容

4.4 研究意义

4.5 技术路线

第二部分试验研究

试验一二甲双胍对产蛋鸡肝细胞AMPK活性及脂质代谢的影响

1 前言

2 材料与方法

2.1 试验设计

2.2 主要仪器设备和试剂

2.3 细胞分离和培养

2.4 培养细胞的处理

2.5 测定指标和方法

2.6 数据处理和统计分析

3 结果与分析

3.1 产蛋鸡肝细胞的分离、培养结果和生化参数

3.2 二甲双胍对产蛋鸡肝细胞AMPK、ACC和HMGR活性的影响

3.3 二甲双胍对产蛋鸡肝细胞脂质代谢的影响

3.4 AMPK活性与ACC、HMGR活性、细胞TG、TC合成量的相关分析

4 讨论

4.1 产蛋鸡肝细胞的分离及完整性和活力

4.2 二甲双胍对产蛋鸡肝细胞AMPK、ACC和HMGR活性的影响

4.3 二甲双胍对产蛋鸡肝细胞脂质代谢的影响

4.4 二甲双胍在产蛋鸡肝细胞培养中的适宜添加量

5 小结与结论

试验二二甲双胍对产蛋鸡肝脏AMPK活化的效应研究

1 前言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 试验设计

2.3 饲养管理

2.4 样品采集和制备

2.5 测定指标

2.6 数据处理和统计分析

3 结果与分析

3.1 二甲双胍对产蛋鸡生产性能的影响

3.2 二甲双胍对肝脏AMPK、ACC和HMGR活性的影响

3.3 二甲双胍对肝脏甘油三酯和胆固醇含量的影响

3.4 肝脏AMPK活性与ACC、HMGR活性、肝脏TG、TC含量的相关分析

4 讨论

4.1 二甲双胍对产蛋鸡生产性能的影响

4.2 二甲双胍对产蛋鸡肝脏AMPK、ACC和HMGR活性的影响

4.3 二甲双胍对产蛋鸡脂质代谢的影响

4.4 活化产蛋鸡肝脏AMPK适宜的二甲双胍剂量

5 小结与结论

试验三 AMPK活化对产蛋鸡脂质代谢和内分泌激素的影响

1 前言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 试验设计

2.3 饲养管理

2.4 样品采集和制备

2.5 测定指标

2.6 数据处理利统计分析

3 结果与分析

3.1 对产蛋鸡生产性能的影响

3.2 对产蛋鸡肝脏AMPK、ACC和HMGR活性的影响

3.3 对产蛋鸡脂质代谢的影响

3.4 对产蛋鸡血糖、胰岛素和雌二醇含量的影响

4 讨论

4.1 AMPK活化模型的可靠性

4.2 AMPK对产蛋鸡脂质代谢的可能作用机制

5 小结与结论

试验四 AMPK对调节鸡蛋胆固醇含量的物质-洛伐他汀的介导作用

1.前言

2.材料与方法

2.1 动物实验：

2.2 细胞培养

2.3 数据处理和统计分析

3 结果与分析

3.1 动物试验

3.2 细胞培养

4 讨论

4.1 洛伐他汀对产蛋鸡胆固醇代谢的调控

4.2 AMPK介导洛伐他汀对蛋鸡胆固醇代谢的调节作用

5 小结与结论

第三部分总体讨论与结论

1 总体讨论

2 本研究的主要结论

3 本研究的创新点

4 有待进一步解决的问题

参考文献

致谢

附录1

附录2

附录3

攻读学位期间发表的文章

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