论文摘要
催产素(Oxytocin,OT)是一种在下丘脑合成、储存于垂体后叶、经垂体门脉系统释放的神经垂体激素。它除具有促进子宫收缩和泌乳等经典作用外,还有许多重要的生理学效应,包括调节中枢神经系统和心血管系统功能。广泛分布的催产素受体(oxytocin receptor,OTR),经偶联G_q/11和磷脂酶C介导催产素的生理和药理学作用。 OTR属G蛋白偶联受体(G protein coupled receptors,GPCRs)家族。最早克隆的催产素受体是人的催产素受体,它由389个氨基酸残基构成,具有典型的G蛋白偶联受体的结构特征,包括7个跨膜结构域、3个细胞内环及3个细胞外环。第一胞外环和第二胞外环的两个半胱氨酸残基形成二硫键,对维持受体的结构及其与配体的结合具有重要作用。C末端的两个半胱氨酸残基构成棕榈酰化位点,形成胞内第四环,可能构成G蛋白结合区域。最近的研究表明,OTR可以以同源或异源的多聚体形式存在,与配体的结合不影响OTR多聚体的形成,提示OTR的多聚化是一种组成型多聚体,而非配体依赖。我们以往的研究表明,生理状态下OTR以多聚体的形式存在。去垢剂不影响OTR多聚体的形成,但还原剂可使OTR解聚为单体,表明OTR分子的半胱氨酸残基是形成这种多聚体的关键残基。 OTR一级结构显示,OTR共有14个半胱氨酸残基,包括细胞内环2个、细胞外环2个、跨膜结构域7个、羧基末端3个。我们以往的研究已经证实,催产素受体胞外域的2个半胱氨酸残基(112位和187位)不影响OTR的多聚化,但显著影响与配体的结合和激动剂诱导的OTR的内化。本研究旨在探讨OTR中剩下的12个半胱氨酸残基中哪一个是多聚体形成的关键残基,这一残基对OTR的功能有何种影响。 本研究用点突变的方法逐一突变剩下的12个半胱氨酸残基,构建10个突变体,再将突变体稳定转染至CHO细胞,然后运用免疫共沉淀、免疫印迹、免疫荧光和放射配体结合试验等方法,研究突变体对催产素受体多聚化、催产素受体内吞和催产素受体与配体结合力的影响。
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