绿茶多酚对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

论文摘要

目的:绿茶多酚（Green tea polyphenols,GTPs）是绿茶提取物中的有效成分,本研究拟探讨其对鱼藤酮诱导所致帕金森病（PD）细胞模型的保护作用及其可能机制,为GTPs用于PD的治疗提供理论依据。方法:PC12细胞随机分为鱼藤酮模型组、司来吉兰组和GTPs三剂量（5,15,45μg/ml）组,另设正常对照组。以高度分化的PC12细胞作为模型细胞,采用鱼藤酮诱导细胞损伤,以制得帕金森病（PD）的细胞模型,用不同浓度的绿茶多酚及阳性药B型单胺氧化酶抑制剂司来吉兰预处理后,再分别用以下方法试验:1.光学显微镜下观察细胞形态及细胞计数;噻唑蓝（MTT）法检测细胞活性并计算细胞存活率;用试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出率;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;流式细胞仪（FCM）测定细胞周期、细胞凋亡率;测定胞浆中多巴胺的含量;2.用试剂盒测定丙二醛（MDA）的含量,超氧化物歧化酶（SOD）活性以及谷胱甘肽（GSH）的含量;利用RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA的含量;荧光法测定caspase-3的活性;用western blotting法测定各组细胞内caspase-3的表达。并对结果进行统计学分析。结果:1.显微镜下观察,正常组细胞分化明显,生长良好。鱼藤酮处理组出现细胞形态学改变,生长受到影响,并出现凋亡、坏死。而药物预处理组则使细胞状态明显好转,其中以15μg/ml绿茶多酚组的效果最明显;MTT检测显示,随着鱼藤酮剂量的增加,PC12细胞的存活率逐渐下降,而绿茶多酚和司来吉兰处理后,细胞存活率明显升高;LDH漏出率检测表明,鱼藤酮模型组细胞LDH释放量升高（P<0.01）,而绿茶多酚及司来吉兰处理组细胞的LDH漏出率比鱼藤酮组细胞明显降低（P<0.01）;Hoechst33258染色显示,鱼藤酮组可见大量浓染致密的凋亡细胞,且可见到DNA荧光碎片,绿茶多酚保护后,凋亡细胞明显减少,其中以15μg/ml组的保护效果最好,荧光强度最低;流式细胞仪检测结果显示,绿茶多酚处理组和司来吉兰处理组可明显改善鱼藤酮作用后的细胞凋亡;和鱼藤酮对照组（2.5μmol/L）相比较,司来吉兰预处理组（50μmol/L）和绿茶多酚处理组（5、15、45μg/ml）的细胞胞浆DA含量增加（P<0.01）。2.进一步试验发现,与鱼藤酮对照组相比,绿茶多酚和司来吉兰处理组细胞胞浆中MDA含量降低（P<0.01）,SOD活性升高（P<0.01）, GSH含量降低（P<0.01）,caspase-3的活性降低明显（P<0.01）;鱼藤酮模型组Bcl-2 mRNA的表达量明显减少,Bax mRNA的表达量明显增加,而绿茶多酚和司来吉兰组可明显增加Bcl-2 mRNA的表达量,并降低Bax mRNA的表达量,从而提高Bc1-2/Bax的比值;与空白对照组相比,鱼藤酮模型组caspase-3的表达增加,绿茶多酚各剂量组可以减少caspase-3的表达（P<0.01）。各种指标均显示,绿茶多酚15μg/ml+鱼藤酮组的保护作用最明显。结论:绿茶多酚能抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与抗凋亡,维持多巴胺含量,抗氧化作用等有关。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 绿茶多酚对鱼藤酮诱导PC12 细胞损伤的保护作用
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 绿茶多酚对鱼藤酮诱导PC12 细胞损伤的保护机制研究..
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文