Piceatannol对佛波酯诱导MCF-10A细胞NF-κB激活和COX-2表达的抑制作用

论文摘要

现已有大量研究表明,慢性炎症与癌症的发生发展有着密切的联系。炎性细胞缓慢发展为肿瘤的病因已成为癌症研究的热点之一。环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）是前列腺素（PG）合成过程中一个重要的限速酶,主要在炎症细胞表达。COX-2在人类许多癌前病变和恶性肿瘤中均有高表达,从而促进肿瘤细胞增殖,抑制凋亡。前期研究表明,葡萄中大量存在的白藜芦醇（3,4,5-三羟基二苯乙烯,Resveratrol）可以有效抑制cox-2基因转录的调控转录因子NF-κB,从而起到抗炎,抗肿瘤的作用。白藜芦醇羟基衍生物Piceatannol（反-3,4,3′,5′-四羟基二苯乙烯）,是在大戟属植物中被首次发现的,具有很强的抗炎、抗增殖等多种药理活性,但其内在的分子机制还不是很清楚。本课题旨在研究Piceatannol是否与其结构衍生物白藜芦醇一样具有抑制COX-2表达和NF-κB活化的药理活性,以及对其内在的分子机制进行初步的探讨。本实验研究表明,Piceatannol可有效拮抗佛波酯（12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋,TPA）诱导正常乳腺上皮细胞（MCF10A）cox-2基因的mRNA转录因子和蛋白表达水平。经Piceatannol处理过的MCF10A细胞可对TPA诱导的NF-κB DNA元件结合活性有很强的抑制作用,此作用在一定程度上超越了白藜芦醇和另一同类衍生物Oxyresveratrol（反-2,3′,4,5′-四羟基二苯乙烯）。因此,苯环上羟基数量的增加或减少以及羟基位置的改变对抑制NF-κB活性起重要作用。Piceatannol能够抑制TPA诱导的IκB的磷酸化与降解,从而阻止了p65亚基由胞质转移至核内。巯基还原剂二硫苏糖醇（DTT）可逆转Piceatannol对NF-κB DNA元件结合活性的抑制作用,其发生机制可能与调节IKK激酶结构域上半胱氨酸的还原态有关。Piceatannol对NF-κB转录活性的直接抑制作用及可能机制还在进一步的研究当中。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 癌症的概念
• 1.2 白藜芦醇及其衍生物Piceatannol的抗肿瘤作用
• 1.3 COX-2炎性蛋白与癌症的关系
• 1.4 转录因子NF-κB在炎症相关癌症中的作用
• 1.5 AP-1
• 第二章 PIC对TPA诱导MCF-10A细胞NF-κB信号传导途径的抑制作用研究
• 1 实验材料
• 1.1 细胞
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 MTT测定细胞活性
• 2.3 EMSA凝胶迁移实验
• 2.4 Western Blotting实验
• 2.5 免疫细胞化学法
• 3 实验结果
• 第三章 PIC对TPA诱导MCF-10A细胞COX-2表达的影响
• 1 实验材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 Western Blotting实验
• 2.3 细胞总RNA提取和RT-PCR
• 3 实验结果
• 第四章 PIC对NF-κB抑制机理的初步探讨
• 1 实验材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 流式细胞仪测定细胞内活性氧（ROS）的含量
• 2.2 体外EMSA实验分析
• 3 实验结果
• 第五章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢