喘可治注射液治疗支气管哮喘的临床与实验研究

论文摘要

研究目的以变应性哮喘免疫治疗的研究热点——Foxp3+CD4+CD25+调节性细胞（Foxp3+CD4+CD25+Tr）的诱导为切入点,探讨补肾温阳模式中药（喘可治注射液）防治变应性哮喘的免疫调节可能机制及其疗效。研究方法1.实验研究：将Balb/C小鼠分为对照组、哮喘组、喘可治（CKZ）组三组,采取以OVA经腹腔注射致敏加滴鼻激发复制变应性哮喘模型,CKZ组给予喘可治注射液腹腔注射治疗,对照组与哮喘组给予生理盐水腹腔注射。分别观察各组小鼠的肺部病理改变,流式细胞术检测CD4、CD25、Foxp3的百分比,RT-PCR检测Foxp3、TGF-βIL-lOmRNA表达情况；2.临床研究：选取我院呼吸内科40例哮喘发作期轻、中、重度患者,随机分为对照组和喘可治（CKZ）组,对照组给予常规治疗,CKZ组在常规治疗基础上加予喘可治注射液肌注足三里（4ml／次,qd,7天）,疗程为7天。观测并记录治疗期间第1、3、5、7天的主症、PEF值、外周血T淋巴细胞亚群的变化。研究结果（一）实验部分1.哮喘组较对照组出现明显气管壁增厚,气道周围炎症细胞浸润聚集,以嗜酸性粒细胞（EOS）和淋巴细胞为主,伴见周围血管明显充血扩张,肺泡出现代偿性扩张,提示哮喘模型制备成功；CKZ组与哮喘组比较,气道周围炎症细胞尤其是EOS的浸润明显减少,且周围血管充血、肺泡代偿扩张也减轻,提示CKZ的治疗能够有效减轻哮喘小鼠气道炎症反应；2.哮喘组与对照组比较,脾脏CD4+T、CD4+CD25+Tr、Foxp3+CD4+CD25+Tr均明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）；CKZ组与哮喘组比较,CD4+T、CD4+CD25+Tr、Foxp3+CD4+CD25+Tr均明显上升,差异具有统计学意义（P<0.05）；3.哮喘组与对照组比较,肺组织Foxp3mRNA升高,差异有统计学意义（P<0.05）,而IL-10、TGF-β也明显升高,且有显著性统计学差异（P<0.01）；CKZ组与哮喘组比较,Foxp3、IL-10、TGF-βmRNA表达下降,IL-10、TGF-βmRNA差异有显著性统计学意义（P<0.01）；（二）临床部分1.治疗7天后,与对照组相比,CKZ组CD4、CD8上升,两组CD4、CD8差异具有统计学意义（P<0.05）；CKZ组患者在治疗第3天、第5天、第7天PEF占预计值百分比均比对照组提升更大,差异有显著统计学意义（P<0.05）；2.CKZ组患者在治疗第5天、第7天的疗效优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）；CKZ组的开始有效时间、开始显效时间短于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。研究结论1.哮喘小鼠表现出免疫异常的状态,哮喘小鼠脾细胞CD4+T%、CD4+CD25+Tr%、Foxp3+CD4+CD25+Tr%明显下降,哮喘小鼠肺组织Foxp3、TGF-β、IL-10mRNA表达上调,CKZ组与哮喘组比较,CD4+T%、CD4+CD25+Tr%、Foxp3+CD4+CD25+Tr%明显上升,IL-10、TGF-βmRNA表达下降；病理显示喘可治注射液可以明显减轻气道炎症,抑制炎症细胞浸润；2.急性发作期哮喘患者外周血T淋巴细胞亚群比例异常。喘可治注射液治疗组患者较对照组相比,能更有效调节T淋巴细胞亚群的比例,并能更快、更好缓解哮喘患者的临床症状；3.以喘可治注射液为代表的补肾温阳中药的免疫治疗机制可能与通过诱导Foxp3+调节性T细胞的活化而调节机体异常的免疫状态一定关系。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 文献研究
• 一、中医药对哮喘的研究进展
• （一） 中医病因病机研究
• （二） 现代中医补肾温阳法治疗哮喘的概况
• 二、喘可治注射液的免疫研究进展
• （一） 抑制胸腺细胞凋亡
• （二） 调节Th1/Th2免疫失衡
• +CD25⁺Tr水平发挥免疫抑制效应'>（三） 可升高CD4⁺CD25⁺Tr水平发挥免疫抑制效应
• （四） 可改善脾肾阳虚型哮喘患者的临床症候
• 三、西医对哮喘的免疫研究的热点
• +T细胞的简介'>（一） CD4⁺T细胞的简介
• （二） 哮喘免疫机制的经典途径
• （三） "卫生学假说"—Th1/Th2平衡理论
• （四） 调节性T细胞及转录因子Foxp3的发现
• 四、总结与假说
• 第二部分 实验部分
• 一、材料与设备
• （一） 主要试剂
• （二） 主要仪器
• （三） 主要试剂配方
• 二、实验动物
• 三、实验方法
• （一） 实验分组
• （二） 实验流程与方案
• 四、实验统计方法
• 五、实验结果
• （一） 小鼠肺组织病理改变
• +T、CD4⁺CD25⁺Tr、FoxpTCD4⁺CD25⁺Tr结果'>（二） 流式细胞术检测CD4⁺T、CD4⁺CD25⁺Tr、FoxpTCD4⁺CD25⁺Tr结果
• （三） 肺组织Foxp3、IL-10、TGF-β mRNA的RT-PCR检测结果
• 六、结果讨论
• （一） 病理切片结果讨论
• （二） RT-PCR、FACS的结果讨论
• 七、结论
• 八、问题与展望
• 第三部分 临床部分
• 一.研究背景和目的
• （一） 研究背景
• （二） 研究目的
• 二、研究对象
• （一） 样本来源
• （二） 纳入标准
• （三） 排除标准
• （四） 剔除标准
• 三、研究方法
• （一） 研究设计
• （二） 主要观察指标
• （三） 疗效判断标准
• （四） 中医证型诊断标准
• （五） 数据分析及统计学方法
• （六） 技术路线
• 四、临床资料分析
• （一） 基线情况比较
• （二） 中医证型比例情况
• （三） 实验室检查指标的比较
• （四） 临床疗效的比较
• （五） 经济学指标的比较
• 五、临床结果讨论
• （一） 两组基线资料比较
• （二） 哮喘中医证型以肺脾肾虚、冷哮为主
• （三） 喘可治注射液可以调节哮喘患者免疫紊乱
• （四） 喘可治注射液能更有效地辅助改善哮喘临床症状
• 六、临床研究结论和存在问题
• 第四部分 总结和展望
• 结语
• 附录
• 参考文献
• 致谢