论文摘要
目的肝细胞生长因子（HGF）、转化生长因子β1（TGFβ1）干预体外培养的人心房成纤维细胞后,检测细胞增殖,细胞结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA和蛋白的表达及胶原、明胶酶分泌,旨在首次观察TGFβ1、HGF正负调控风湿性心脏病（RHD）心房颤动（AF）患者心房成纤维细胞纤维化与AF发生和维持的关系。方法20例RHD接受换瓣手术患者,收集受试对象一般临床资料。其中窦性心律（SR）组10例;慢性AF（CAF）组10例。无菌取右心耳组织,体外分离培养人心房成纤维细胞,HGF和TGFβ1干预并实验分组,WST-1检测细胞增殖,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测细胞I型胶原、明胶酶（MMP-2）、TIMP-2、TGFβ1、CTGF和α-SMA的mRNA含量,免疫荧光、免疫印迹（Western-Blot）检测细胞CTGF、α-SMA蛋白表达水平。结果（1）体外成功分离培养人心房成纤维细胞,经细胞免疫荧光鉴定证实。（2）TGFβ1和HGF分别呈剂量及时间依赖性促进和抑制人心房成纤维细胞增殖,10ng/mlTGFβ1、48h和100ng/mlHGF、48h作用最显著。HGF部分拮抗TGFβ1作用。（3）与SR组比较,CAF组左房明显扩大,成纤维细胞I型胶原、MMP-2、TGFβ1、CTGF和α-SMA的mRNA水平明显增加,TIMP-2的mRNA水平明显减少;CAF组I型胶原、MMP-2的mRNA水平与LAD、AF持续时间呈正相关,与TGFβ1、CTGF和α-SMA的mRNA水平呈明显正相关;MMP-2的mRNA水平与TIMP-2的mRNA水平呈明显负相关。（4）与SR组比较,CAF组成纤维细胞CTGF、α-SMA蛋白表达水平明显增加。CTGF的蛋白水平与α-SMA蛋白水平呈明显正相关,与LAD、房颤持续时间呈明显正相关。（5）TGFβ1和HGF干预后,分别促进和抑制CAF组成纤维细胞I型胶原、MMP-2、CTGF、α-SMA mRNA表达及CTGF、α-SMA蛋白表达,抑制和促进TIMP-2 mRNA表达。（6）HGF部分抑制CAF组心房成纤维细胞TGFβ1mRNA的表达,HGF可能通过部分抑制CTGF表达,拮抗TGFβ1的作用。结论AF患者心房成纤维细胞中TGFβ1、CTGF表达增加促进I型胶原、MMP-2和α-SMA分泌,导致心房结构重构,可能与房颤的发生和维持有关。TGFβ1和HGF分别通过促进和抑制心房成纤维细胞增殖,上调和下调细胞CTGF、α-SMA表达及胶原和MMP-2分泌,促进和抑制心房纤维化。HGF可能通过抑制心房成纤维细胞CTGF表达,拮抗TGFβ1促心房纤维化作用。
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