体外共培养潜伏感染的老年小鼠大脑皮质及肺组织内HCMV研究

论文摘要

目的 取HCMV先天性潜伏感染小鼠脑、肺组织并制成细胞悬液,体外与HF细胞进行共培养,观察细胞中潜伏的病毒再激活现象,为研究HCMV潜伏再激活及阐明机制提供证据和新线索。 方法 依据随机抽样原则,取HCMV先天性潜伏感染组小鼠及DMEM对照组小鼠各6只,分别将其大脑皮质和肺组织制成细胞悬液。染色计数活细胞,细胞终浓度为1×106/ml,接种至放有盖玻片的细胞培养板中。随即加入1×106/ml的人胚成纤维细胞（HF）悬液,建立共培养体系。同时设立HCMV阳性对照和HF阴性对照。逐同观察细胞生长情况并记录。分别在共培养后的第1、3、7、14、28、35d收获细胞,进行如下检测:（1）观察共培养物上HCMV特征性CPE;（2）PCR、RT-PCR分别检测HCMV IE、UL83 DNA和相应的mRNA;（3）取共培养细胞爬片做间接免疫荧光试验,分别检测HCMV IE和pp65抗原的表达;（4）透射电镜观察疱疹病毒样颗粒和感染的HF细胞超微结构变化。 结果 HCMV先天性潜伏感染的老年小鼠大脑皮质和肺组织细胞体外分别与HF共培养组:（1）HCMV潜伏感染的老年小鼠大脑皮质和肺组织细胞经体外与HF共培养,于第7d开始出现HCMV特征性CPE,病变呈灶性并逐渐扩展至整个单层,病变特征同病毒阳性对照。潜伏病毒再激活率为100%。（2）PCR扩增出HCMVIE、UL83 DNA且序列测定与Genbank上登录的基因序列比较,一致率分别为99%和100%。RT-PCR检测见HCMVIE、UL83特异性条带,HCMV mRNA在第3d开始表达。HCMV基因的复制具有明显的时序性,HCMV IE基因的表达及转录均早于UL83,随着时间的延长,表达水平逐渐升高。（3）间接免疫荧光试验于共培养后第7d检出IE、pp65蛋白。（4）透射电镜下观察到HF细胞超微结构明显病变,发现典型的疱疹病毒样颗粒。DMEM对照组及HF阴性对照组均末检测到所设置

论文目录

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• 材料方法
• 结果
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• 结论
• 展望
• 参考文献
• 附录一：个人简历
• 附录二：致谢
• 附录三：综述