新型抗HIV-1蛋白西诺维恩、格瑞弗森及其重组导向制剂构建、表达与活性研究

论文摘要

本研究针对当前AIDS/HIV治疗中面临的病毒变异快、病毒感染细胞贮存池难以清除、病毒感染造成机体免疫功能损伤等关键问题,以构建具特异杀伤和免疫治疗双重功能的基因工程制剂为目标,筛选能够与HIV-1膜蛋白特异结合的抗病毒蛋白西诺维恩（CVN）、格瑞弗森（GRFT）以及免疫诱导因子金黄色葡萄球菌外毒素A（SEA）为研究对象,利用细菌和酵母表达系统,获得了重组抗病毒蛋白CVN、GRFT及其偶联SEA的重组导向制剂CS、GS,对其进行初步活性分析。同时制备了稳定表达中国流行株HIV-1膜蛋白的靶细胞模型,利用该模型,通过免疫印迹（Western blot）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光测定（IFA）、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤试验等,对CVN、GRFT及其重组导向制剂CS、GS的体外结合活性、细胞结合活性及细胞杀伤活性进行研究。结果表明,成功获得了抗病毒蛋白和重组导向制剂,并且都具有良好的细胞结合活性。重组导向制剂可非特异性活化PBMCs、特异性介导CTLs杀伤表达HIV-1膜蛋白的靶细胞,为该制剂进一步推向临床奠定了基础。

论文目录

• 内容提要
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 HIV 感染分子机制及其防治研究现状
• 1 AIDS/HIV 的流行情况
• 2 HIV 病原学
• 3 HIV 感染与致病分子机制
• 4 HIV 的进化与变异
• 5 AIDS/HIV 防治研究现状
• 6 问题与展望
• 第二章 抗HIV 重组导向制剂与免疫治疗研究进展
• 1 AIDS 靶向治疗的历史、原理及研究现状
• 2 AIDS 靶向治疗运载工具研究
• 3 AIDS 靶向治疗生物弹头研究
• 4 AIDS 新的免疫治疗策略研究
• 5 问题与展望
• 6 研究目的与意义
• 第二篇 研究内容
• 第一章 新型抗病毒基因西诺维恩、格瑞弗森的合成构建、原核表达及多克隆抗体制备
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 抗HIV 重组导向制剂CS、GS 的构建及原核表达
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 重组抗病毒蛋白及其导向制剂的纯化与复性
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 HIV-1 感染靶细胞模型的制备
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 西诺维恩、格瑞弗森及其重组导向制剂活性检测
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第六章 西诺维恩、格瑞弗森及其重组导向制剂在酵母中表达探索研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻博期间发表的学术论文及其他成果
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介
• CURRICULUM VITAE