植入前期与分娩前期子宫差别基因筛选及IL-1β对胚泡植入前后子宫MMP2表达的影响

论文摘要

妊娠主要包括胚泡着床,妊娠的维持以及分娩等一系列重要的阶段。从免疫学角度来讲,母体子宫作为特殊的生殖免疫器官在胚泡着床和分娩时分别表现为免疫耐受和免疫排斥,这两个生理反转过程必然涉及基因的时空差别表达;胚泡植入又涉及大量细胞因子及基质金属蛋白酶的协同参与。研究这些关键过程将使我们对胚泡植入和分娩的分子机理获得进一步的认识,同时也可为器官移植、同种或异种克隆等研究热点提供基础理论依据,在临床上也为治疗一些妊娠疾病如不孕、流产、胎儿畸形等提供药物可能作用的靶位点。本文采用抑制消减杂交技术,以Sprague-Dawley大鼠（SD大鼠）为实验动物,选取妊娠过程中植入前期（第5d）和分娩前期（第19d）子宫分别作为驱动方和实验方,进行抑制消减杂交,获得的消减文库经差异筛选得到70 个阳性克隆。序列测定和同源对比分析表明这些克隆所代表的基因在大鼠基因库中分别与8个已知基因有90%～100%不等的同源性。这些基因均差别表达于分娩前期子宫组织中,其中首次发现尿鸟苷蛋白和干扰素诱导蛋白16在SD 大鼠妊娠子宫中有表达。RT-PCR 及半定量分析显示尿鸟苷蛋白基因在妊娠第19d子宫中的表达显著高于妊娠第5d （P<0.001）,而干扰素诱导蛋白16差异表达不明显。在妊娠第6d、第9d 和第12d 的子宫中尿鸟苷蛋白基因自胚泡植入后其表达逐渐上升,妊娠第15d 下降,在妊娠第19d 表达量最高。结果提示特异表达的尿鸟苷蛋白基因可能与分娩有关。采用半定量RT-PCR、免疫组化等方法,对胚泡植入前后时期SD 妊娠大鼠体内注射超生理剂量的白细胞介素1β（IL-1β）,检测处理前后妊娠子宫中基质金属蛋白酶2（MMP2）的表达变化,探讨IL-1β对MMP2表达的影响。统计分析表明妊娠第4d 及妊娠第9d处理组与对照组无明显差异,妊娠第6d 处理组MMP2表达明显低于对照组（P<0.01）;免疫组化检测显示,妊娠第4d,MMP2主要表达于子宫腔上皮,基质及腺体表达较少;妊娠D6,

论文目录

• 第一部分 文献综述
• 第一章 筛选差别表达基因的方法
• 1 差异显示PCR
• 2 RNA指纹技术
• 3 消减杂交
• 3.1 减法杂交技术
• 3.2 代表性差异分析技术
• 3.3 获得全长基因的消减杂交技术
• 3.4 抑制消减杂交技术
• 4 基因表达系列分析
• 5 基因芯片法
• 6 双向电泳技术
• 7 噬菌体全套抗体库技术
• 8 大量平行测序技术
• 9 小结
• 第二章 基质金属蛋白酶家族及其生物学功能
• 1 MMPs 的基本结构
• 2 MMPs 的分类
• 3 MMPs 活性的调节
• 3.1 MMPs 的转录
• 3.2 酶原活化
• 3.3 MMPs 活性的抑制
• 4 MMPs 的生物学功能
• 4.1 胚泡植入和胎盘发生
• 4.2 肿瘤细胞的侵入和转移
• 4.3 血管生成
• 第二部分 实验研究
• 第一章 植入前期与分娩前期子宫差别基因筛选及表达
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 总RNA的定性分析
• 2.2 sscDNA 的合成
• 2.3 SSH
• 2.4 消减效率的分析
• 2.5 消减文库中插入片段的PCR 鉴定
• 2.6 斑点杂交
• 2.7 阳性克隆的测序及分析
• 2.8 差别基因的表达
• 3 讨论
• 第二章 IL-1β对胚泡植入前后子宫MMP2表达的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 材料和试剂
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 MMP2的表达
• 2.2 MMP2免疫组化检测
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历