钝顶螺旋藻/节旋藻藻蓝蛋白的提取纯化及抗肿瘤免疫效应研究

论文摘要

从海洋生物中寻找高效、低毒副作用的抗肿瘤药物是近年天然药物研究的新领域。近年来,随着海洋生物药学研究的不断深入,发现许多海洋生物尤其许多藻类,其体内含有各种特有药物功能。其中钝顶螺旋藻（Spirulina platensis,又称钝顶节旋藻Arthrospira platensis）中的藻蓝蛋白（C-phycocyanin, CPC）以其特有的营养和保健价值受到广泛的重视。因其水溶性、无毒、清亮且着色力强等优点,CPC被广泛用于食品着色剂和化妆品的添加剂。带有荧光,可用作荧光标记物。另有研究表明藻蓝蛋白具有抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、清除自由基和保肝、降血脂等生理活性,这为螺旋藻在功能性食品和药品领域的开发提供重要的决策依据。目前有关藻蓝蛋白抗肿瘤免疫机理的研究国内外报道较少,本课题研究的主要目的旨在揭示藻蓝蛋白发挥作用的深层机理,以期更深层次的发挥其应用价值。首先对钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的提取和纯化方法进行了改进。采用磷酸盐缓冲液循环冻融联合超生波破碎法,50%硫酸铵沉淀获得CPC,提取率达到13.1%。粗蛋白提取液再经过两次羟基磷灰石柱（HA）层析和sephacrylS-200HR凝胶层析对其进行纯化,纯度达到4.71%。纯化后的CPC在12% SDS-PAGE中得到两条带,分别是α和β两个亚基,分子量分别为21.4ku和17.0ku。结果表明,通过上述分离纯化过程得到了较高提取率和电泳纯度的CPC。然后我们对CPC的抗肿瘤免疫活性进行了研究。主要包括5个方面:①CPC的体外抑瘤作用研究:检测CPC对人宫颈癌细胞（HeLa）、乳腺癌细胞（MCF）、胃癌细胞（NKM）、卵巢癌细胞（SVOA）、人胚肺细胞（HEL）体外生长的影响。在体外培养条件下用不同浓度的CPC（终浓度为20,40,80,160μg/ml）处理这4种癌细胞和1株正常细胞,运用MTT法检测CPC对细胞生长的影响。结果显示CPC对这4种癌细胞均有不同程度的抑制作用,并存在浓度剂量效应,高浓度抑制作用强,但对正常细胞无明显影响。②CPC诱导HeLa细胞凋亡的分子免疫机理探讨:通过流式细胞仪检测CPC对HeLa细胞的细胞周期变化的影响,结果发现出现一个亚二倍体峰（G0/G1）;电镜检测细胞的凋亡形态;琼脂糖凝

论文目录

• 缩 写 表
• 摘 要
• Abstract
• 第一章 文献综述和立项依据
• 第一节 螺旋藻/节旋藻概述
• 1. 螺旋藻/节旋藻的研究历史、生态、形态结构及生活史
• 2. 螺旋藻的营养价值和药用价值
• 第二节 螺旋藻藻蓝蛋白的理化性质研究
• 1. 藻蓝蛋白的提取
• 2. 纯化方法
• 3. 理化特性研究
• 4. 生理活性研究
• 5. 藻蓝蛋白产品的研究及开发应用前景
• 第三节 藻蓝蛋白基因及其启动子的研究现状
• 1. 藻胆蛋白基因的克隆与特性研究
• 2. 藻胆蛋白的表达研究
• 3. 藻蓝蛋白基因启动子
• 第四节 细胞凋亡
• 1. 细胞凋亡的形态学特征和生物化学改变
• 2. 细胞凋亡的机理
• 3. 参与细胞凋亡的调节基因
• 4. 细胞凋亡的检测
• 5. 细胞凋亡与疾病
• 6. 细胞凋亡研究的意义
• 第五节 CD59 研究进展
• 1. CD59 的发现和命名
• 2. CD59 的理化性质、结构和分布
• 3. CD59 的功能
• 4. CD59 与疾病
• 5. 结语与展望
• 第六节 研究课题的提出及研究方案
• 1. 立题依据
• 2. 研究内容
• 参考文献
• 第二章 钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的提取和纯化
• 0. 前言
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 参考文献
• 第三章 钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的体外抑瘤作用研究
• 0. 前言
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 参考文献
• 第四章 钝顶螺旋藻藻蓝蛋白对 HeLa 细胞凋亡信号传导作用的研究
• 0. 前言
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 参考文献
• 第五章 钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的体内抗肿瘤免疫效应研究
• 0. 前言
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 参考文献
• 第六章 钝顶螺旋藻藻蓝蛋白对 HeLa 细胞 CD59 基因表达调控作用的研究
• 0. 前言
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 参考文献
• 第七章 钝顶螺旋藻藻蓝蛋白介导的光动力学疗法用于治疗宫颈癌的研究
• 0. 前言
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 参考文献
• 总结
• 论文发表情况
• 致谢