蛋肉鸡骨骼肌卫星细胞的特性比较及分析

论文摘要

肌卫星细胞是一类存在于成体骨骼肌纤维基膜和原浆膜间的梭形或纺锤型细胞。卫星细胞在骨骼肌生长发育中起关键作用,它调节着出生后肌肉的生长,是成熟动物体骨骼肌的干细胞之一。蛋鸡和肉鸡骨骼肌发育性状的差异在出生后表现得最显著,这与两者骨骼肌组织中存在的卫星细胞的特性具有很大的联系。为了解卫星细胞在成体骨骼肌发育中的作用,以及在蛋、肉鸡骨骼肌发育中作用的差异,本课题在研究建立7日龄鸡骨骼肌卫星细胞分离、培养方法的基础上,对蛋肉鸡肌卫星细胞的特性进行了比较和分析。采用机械和酶消化方法分离鸡胸肌细胞;用过滤和差速贴壁方法得到较纯的卫星细胞;用高浓度血清培养基维持卫星细胞的生长;利用肌卫星细胞特异性标记基因desmin的抗体检验所获细胞为肌肉卫星细胞。从而建立了7日龄鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养系统,为进行鸡成体骨骼肌发育的研究奠定条件基础。为了比较蛋肉鸡肌卫星细胞的生长特性,利用血球计数板进行细胞计数绘制出二者的细胞生长曲线。结果显示:在体外相同的培养条件下,肉鸡肌卫星细胞的增殖、分化速度大于蛋鸡肌卫星细胞;同时蛋肉鸡肌卫星细胞中细胞周期调控相关基因（p21和Cyclin D1）表达存在差异,可能是肉鸡卫星细胞的生长速度高于蛋鸡卫星细胞以及分化时间明显早于蛋鸡的原因之一。为了比较分析细胞因子对于蛋肉鸡肌卫星细胞特性的影响,通过流式细胞仪检测经细胞因子bFGF和Myostatin处理后,蛋肉鸡骨骼肌卫星细胞的细胞周期变化情况;并通过RT-PCR分析各功能基因的表达变化差异。结果表明:经相同剂量的同种细胞因子处理后,蛋鸡卫星细胞对于Myostatin的抑制作用十分敏感,而肉鸡则对bFGF的促进增殖作用反应强烈;经细胞因子处理后,在功能基因的表达水平上蛋肉鸡之间也存在着差异,其中Myostatin对于蛋鸡肌卫星细胞中myoD和myogenin的表达抑制作用要较肉鸡中显著得多,其它功能基因的表达情况变化不明显,还有待于进一步的研究。以上结果为进行蛋鸡和肉鸡在出生后骨骼肌发育性状的差异研究、及今后成体骨骼肌发育、卫星细胞在临床上的应用等研究提供理论基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 肌肉发生的概述
• 1.1.1 肌肉发生的过程
• 1.1.2 研究肌肉发生的意义
• 1.2 卫星细胞的概述
• 1.2.1 卫星细胞的起源
• 1.2.2 卫星细胞的增殖和分化
• 1.2.3 影响卫星细胞增殖与分化的因素
• 1.3 模式生物的选择
• 1.4 国内外在该方向的研究现状及分析
• 1.4.1 骨骼肌再生与骨骼肌肌卫星细胞
• 1.4.2 卫星细胞的生物学特性研究
• 1.4.3 卫星细胞在组织工程中的应用
• 1.4.4 国内外有关于鸡骨骼肌卫星细胞的研究进展
• 1.5 本课题研究的目的和意义
• 第2章 实验材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 引物的设计与合成
• 2.1.3 药品和试剂
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.1.5 主要软件
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 鸡骨骼肌卫星细胞的获取和原代培养
• 2.2.2 鸡骨骼肌卫星细胞细胞计数及生长曲线绘制
• 2.2.3 肌卫星细胞免疫荧光染色
• 2.2.4 细胞因子处理肌卫星细胞
• 2.2.5 流式细胞仪检测细胞周期
• 2.2.6 肌卫星细胞功能基因的半定量检测
• 2.2.7 统计学方法
• 2.3 本章小结
• 第3章 鸡骨骼肌卫星细胞提取方法的建立及基本生物学特性的检测
• 3.1 7 日龄鸡雏肌卫星细胞获取条件的建立
• 3.1.1 肌卫星细胞的分离
• 3.1.2 肌卫星细胞原代培养
• 3.2 获取的鸡骨骼肌卫星细胞的鉴定与形态学观察
• 3.2.1 获取的肌卫星细胞的鉴定
• 3.2.2 获取的肌卫星细胞的形态学观察
• 3.3 本章小结
• 第4章 蛋肉鸡肌卫星细胞增殖能力的差异分析
• 4.1 蛋肉鸡骨骼肌卫星细胞生长曲线的测定
• 4.2 蛋肉鸡肌卫星细胞中骨骼肌发育相关因子的表达
• 4.3 本章小结
• 第5章 蛋肉鸡肌卫星细胞细胞周期的差异分析
• 5.1 细胞因子处理蛋肉鸡肌卫星细胞
• 5.2 细胞因子处理后蛋肉鸡卫星细胞细胞周期变化
• 5.3 细胞因子处理后肌卫星细胞骨骼肌发育相关基因的表达
• 5.4 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 附录 细胞周期检测统计学分析结果
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢