犬源益生菌的筛选及其对犬细菌性腹泻的治疗试验

论文摘要

从三个不同品种健康成年犬的粪便调查了该三犬种的12种常见肠道菌。三种不同品种的宠物犬的12种肠道菌每克粪便的菌数均达到107个以上，而拟杆菌、乳酸杆菌、肠球菌等七种菌达到了每克粪便108个以上，均属于优势菌群。从正常菌群中分离筛选了2株益生乳酸杆菌和1株益生肠球菌，其中L8401为嗜酸乳杆菌，L8416为干酪乳杆菌，E4030为屎肠球菌。它们均能耐受pH2.0的酸度和0.6％的胆盐，对致病性大肠杆菌有较强的抑制活性，进一步的试验证明乳酸杆菌和肠球菌的体外抑菌活性主要通过代谢产物起作用。把所筛选的益生乳酸杆菌、益生肠球菌按照美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）推荐的方法和选药指南进行药敏实验。药敏试验表明：L8401、L8416、E4030三株益生乳酸菌对所试抗生素均敏感。以浓度为109cfu／ml的乳酸杆菌L8401、L8416和肠球菌E4030三株益生乳酸菌菌液分别对昆明系小白鼠实施腹腔注射，进行安全性试验。试验组和对照组小白鼠健康存活并体重增加，证明该三株菌对小白鼠安全无毒。以浓度为5×1010cfu／ml的致病性大肠杆菌O8培养物按10ml／kg体重的剂量实施灌胃，12h灌一次，连续灌胃四次，造腹泻模型。以浓度均为5×108cfu／ml的乳酸杆菌L8401、乳酸杆菌L8416和肠球菌E4030培养液按1∶1∶2的比例混合制备成犬微生态制剂治疗液。用浓度为5×108cfu／ml的犬微生态制剂治疗液分别对低剂量治疗组和高剂量治疗组按5ml／kg体重、10ml／kg体重的剂量实施口服灌胃，抗生素治疗组以庆大霉素5mg／kg体重剂量实施口服灌胃，2次／d，连续灌胃3天。各组对腹泻犬的有效率均达到100％。检测肠道菌群时发现，与微生态制剂治疗组相比，抗生素组大肠杆菌、乳酸杆菌和肠球菌菌数都极显著下降（P＜0.01）；同日高剂量组与低剂量组相比，高剂量组的乳酸杆菌、肠球菌的菌数略高于低剂量组，大肠杆菌数略低于低剂量组，但治疗第二、三日差异不显著（P＞0.05），而第四日差异显著（P＜0.05）。从治疗犬细菌性腹泻的结果可以看出，从健康犬分离筛选得到的乳酸杆菌和肠球菌混合制备的犬微生态制剂治疗液对该病有较好的治疗效果。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 我国宠物犬饲养现状
• 1.2 犬用微生态制剂的现状
• 1.3 犬用微生态制剂常用菌种的应用研究情况
• 1.3.1 乳酸杆菌
• 1.3.2 肠球菌
• 1.3.3 双歧杆菌
• 1.3.4 芽孢杆菌
• 1.4 益生元在犬用微生态制剂中的应用研究情况
• 1.5 犬细菌性腹泻的防制现状
• 1.6 犬微生态制剂存在的问题及前景
• 1.7 本研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 菌种
• 2.1.5 试剂
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 犬肠道正常菌群的调查
• 2.2.2 犬肠道正常微生物的分离和鉴定
• 2.2.3 筛选能用于犬微生态制剂的益生菌
• 2.2.4 药敏试验
• 2.2.5 益生菌对小白鼠安全性试验
• 2.2.6 治疗试验
• 2.2.7 数据处理
• 3 结果与分析
• 3.1 犬肠道正常菌群调查结果
• 3.2 菌株的分离和鉴定结果
• 3.2.1 乳酸杆菌的分离和鉴定结果
• 3.2.2 肠球菌的分离和鉴定结果
• 3.3 益生菌的筛选结果
• 3.3.1 益生乳酸杆菌的筛选结果
• 3.3.2 益生肠球菌的筛选结果
• 3.4 药敏试验结果
• 3.4.1 乳酸杆菌药敏试验结果
• 3.4.2 肠球菌药敏试验结果
• 3.5 安全性试验结果
• 3.6 治疗试验结果
• 3.6.1 健康幼犬的菌群调查结果
• 3.6.2 犬细菌性腹泻模型的建立及腹泻试验幼犬的菌群调查结果
• 3.6.3 治疗时试验幼犬的菌群调查结果及临床表现
• 3.6.4 治疗后试验幼犬的菌群调查结果
• 3.6.5 治疗结果
• 4 讨论
• 4.1 犬肠道正常菌群的调查
• 4.1.1 肠道正常菌群的研究方法及其应用
• 4.1.2 犬肠道正常菌群调查结果
• 4.2 益生乳酸杆菌的筛选
• 4.3 益生肠球菌的筛选
• 4.4 益生菌对抗生素敏感性试验
• 4.5 益生菌对小白鼠安全性试验
• 4.6 犬细菌性腹泻模型的建立和益生菌对其治疗试验
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录