陆英提取物保肝作用研究

论文题目: 陆英提取物保肝作用研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 药理学

作者: 杨威

导师: 王敏伟

关键词: 陆英,活性部位,乌索酸,陆英颗粒,保肝作用,免疫系统

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本研究以民间常用抗肝炎中药陆英为研究对象，以AST、ALT和病理检查为指标，观察了不同溶剂制备的陆英提取物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的影响，确定75％乙醇为最佳提取溶剂，经系统溶剂萃取和大孔吸附树脂纯化，确立了陆英75％乙醇提取物经大孔吸附树脂纯化后30％乙醇洗脱物（LY）为主要有效部位，并进行了初步药效学研究，结果表明：LY对四氯化碳（CCl4）、D-半乳糖胺（D-Gal）、刀豆蛋白（ConA）诱导的急性肝损伤显示出良好的抗肝损伤作用，有良好的剂量依赖性；并能明显提高正常小鼠单核-巨嗜细胞吞噬功能，增加血清中异物清除速率，提高肝脾网状内皮系统吞噬指数，提示LY有增强正常小鼠非特异性免疫功能的作用。由于文献报道乌索酸（熊果酸）为陆英保肝降酶的主要有效成分，故此我们进行LY药效学初探时，研究了乌索酸对CCl4、D-GalN诱导的急性肝损伤的保肝作用，结果表明乌索酸标准品经口给药没有抗肝损伤作用。为此，我们进一步建立了LC-MS分析方法测定了大鼠血中乌索酸的方法，比较研究了大鼠灌胃给予陆英提取物和相当于等量的乌索酸对照品溶液后的药物动力学，测定了乌索酸的血药浓度-时间曲线，计算其相应药物动力学参数。大鼠灌胃给予乌索酸标准品后，大鼠血浆中几乎检测不到乌索酸，而给予陆英提取液后乌索酸在1h左右达峰，达峰浓度Cmax为294.8ng·mL-1，消除半衰期t1/2为4.3h。可以推测陆英中的其他化学成分与乌索酸相互作用，促进乌索酸的吸收，能显著影响乌索酸在大鼠体内的药动学行为。经过药效学初探，在确定了“陆英75％乙醇提取物的乙酸乙酯层和经大孔吸附树脂纯化后30％乙醇洗脱”这条工艺后，为进一步考察LY的保肝作用，我们用陆英颗粒（LYKL）作对照，对LY与陆英颗粒进行了较为系统的保肝作用研究。实验结果表明：LY与陆英颗粒对CCl4、D-Gal、ConA、硫代乙酰胺（TAA）致小鼠急性肝损伤有保护作用，可明显降低上述各种化学物质造成的小鼠急性肝损伤血清ALT，AST升高，其中LY量效关系明显；另外，LY与陆英颗粒均能减轻TG在CCl4中毒小鼠肝组织内的蓄积和降低MDA的含量，提高CCl4中毒小鼠肝组织T-SOD的活力及总抗氧化能力（T-AOC），亦能提高CCl4中毒小鼠肝细胞膜和微粒体膜的Ca2+-ATPase的活性，减少GSH代偿性增高的程度；病理结果也表明LY与陆英颗粒对肝细胞损伤具有明显的保护作用；并且LY的作用要明显强于陆英颗粒。同时，LY与陆英颗粒亦能对抗D—半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤导致的血清中ALP、TBIL、TG、NEFA的升高以及Glu含量急剧降低，亦能显著对抗D—半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤肝组织肝糖原含量、Na+-K+—ATPase、Mg2+—ATPase、Ca2+—ATPase、ca2+-Mg2+—ATPase活性降低，LY的作用要明显强于陆英颗粒，并且LY还能抑制本模型大鼠SDH活性降低。在慢性肝损伤实验中，LY能较好的改善肝功能和降低动物病死率，陆英颗粒也能一定程度改善肝功能，却不能明显降低动物病死率，并且高剂量组病死率大于中剂量组；LY与陆英颗粒可一定程度降低复合因素致肝硬化大鼠血清LN，PⅢP，HA及肝组织匀浆HYP含量的升高，在病理切片中可明显看到LY与陆英颗粒各剂量组与模型组比较肝脏病理有不同程度的改善，显示了其保肝作用，并有一定的抑制肝纤维化形成的作用，LY的作用强于陆英颗粒；抗氧化能力检测表明LY与陆英颗粒均能提高肝组织抗氧化的能力，LY还能增强本模型肝组织Ca2+—ATPase的活性。LY与陆英颗粒能较好的对抗豚鼠同种免疫性肝炎模型引起的肝脏病变，二者功效相似。退黄利胆试验结果表明LY与陆英颗粒无明显利胆作用，退黄功效亦较差。对免疫系统作用试验研究结果表明LY与陆英颗粒有提高LY致免疫低下小鼠网状内皮功能的作用；有提高HY致免疫低下小鼠体液免疫的作用；在胎儿脾淋巴细胞转化实验中，试验结果显示CTX与陆英颗粒能促进正常胎儿脾淋巴细胞的增值，而在有ConA及LPS诱导胎儿脾淋巴细胞转化的实验中，LY显示了一定的抑制作用，陆英颗粒却无明显影响。综上所述，可以认为中药陆英75％乙醇提取物经大孔吸附树脂纯化后30％乙醇洗脱物（LY）具有较好的保肝作用，有一定的抑制肝纤维化形成的作用，并且明显优于已上市制剂陆英颗粒，其机制可能与LY中有效成分稳定肝细胞膜，抗脂质过氧化，增强肝组织抗氧化的能力，提高肝细胞膜和微粒体膜ATPase的活性，提高肝细胞线粒体SDH的活性，以及对免疫的双向调节作用有关。

论文目录:

摘要

ABSTRACT

第一章 前言

1.肝病的概况

1.1 概述

1.2 肝脏疾病分类

1.3 肝脏疾病的主要观测指标

1.4 肝病现状

1.5 中草药治疗乙型肝炎的研究概况

2.陆英的研究概况

2.1 陆英的基源

2.2 陆英的本草考证

2.3 陆英的化学成分研究

2.4 陆英的药理作用研究

3.立题依据

第二章 陆英中保肝降酶活性部位的筛选

1 肝损伤模型与药理指标的选择

2 实验材料

3 实验方法和结果

3.1 陆英不同溶剂提取物的药效学筛选

3.1.1 供试药物的制备

3.1.2 动物模型的制备和药物的处理

3.2 陆英保肝降酶活性部位的药效学筛选

3.2.1 不同溶剂萃取法

3.2.2 大孔吸附树脂分离法

4 讨论

第三章 陆英有效部位提取物(LY)保肝降酶药效学初探与乌索酸药动学研究

1 实验材料

1.1 药品与试剂

2 方法与结果

2.1 LY肝降酶药效学初探

2.1.1 实验方法

2.1.1.1 LY与乌索酸(ursolic,U.C)抗CCl_4致小鼠急性肝损伤试验

2.1.2.2 LY与乌索酸(ursolic,U.C)抗D-半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤试验

2.1.1.3 LY抗ConA致小鼠急性肝损伤试验

2.1.1.4 LY对小鼠非特异性免疫功能的影响(碳粒廓清法)

2.1.1.5 统计方法

2.1.2.实验结果

2.1.2.1 LY对CCl_4致小鼠急性肝损伤的影响

2.1.2.2 LY与D-半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤的影响

2.1.2.3 LY对ConA致小鼠急性肝损伤试验的影响

2.1.2.4 LY对小鼠非特异性免疫功能的影响(碳粒廓清法)

2.1.2.5 实验结果小结

2.2 乌索酸大鼠经口给药药动学研究

2.2.1 血浆样品中乌索酸分析方法的建立

2.2.2 乌索酸经口给药的药物动力学研究

3 讨论

第四章 陆英有效部位提取物(LY)与陆英颗粒保肝作用研究

1 实验材料

2 实验方法

2.1 抗急性肝损伤实验研究

2.1.1 LY与陆英颗粒抗CCl_4致小鼠急性肝损伤试验

2.1.2 LY与陆英颗粒抗D-半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤试验

2.1.3 LY与陆英颗粒抗硫代乙酰胺(TAA)致小鼠急性肝损伤试验

2.1.4 LY与陆英颗粒抗ConA致小鼠急性肝损伤试验

2.2 抗慢性实验性肝损伤作用研究

2.2.1 LY与陆英颗粒对营养不良、酒精、CCl_4复合因素致大鼠肝纤维化试验的影响

2.2.2 LY与陆英颗粒对豚鼠同种免疫性肝损伤的保护作用

2.3 利胆退黄作用研究

2.3.1 LY与陆英颗粒异硫氰酸α萘酯实验性肝损伤试验

2.3.2 LY与陆英颗粒对正常大鼠利胆试验

2.4 免疫作用研究

2.4.1 LY与陆英颗粒对小鼠非特异性免疫功能的影响(碳粒廓清法)血清溶血素测定法

2.4.2 LY与陆英颗粒对小鼠特异性体液免疫功能的的影响——血清溶血素测定法

2.4.3 LY与陆英颗粒对6月引产胎儿脾淋巴细胞的影响

3 实验结果

3.1 抗急性肝损伤实验研究

3.1.1 LY与陆英颗粒抗CCl_4致小鼠急性肝损伤试验

3.1.2 LY与陆英颗粒对D—半乳糖胺盐酸盐大鼠急性肝损伤影响

3.2 抗慢性肝损伤实验结果

3.2.1 LY与陆英颗粒对对营养不良,酒精,CCl_4复合因素致大鼠肝纤维化的影响

3.2.2 LY与陆英颗粒对豚鼠同种免疫性肝炎的影响

3.3 利胆退黄作用研究

3.3.1 LY与陆英颗粒对异硫氰酸α萘酯实验性肝损伤的影响

3.3.2 LY与陆英颗粒对正常大鼠胆汁分泌的影响

3.4 免疫学研究

3.4.1 LY与陆英颗粒对小鼠非特异性免疫功能的影响(碳粒廓清法)

3.4.2 LY与陆英颗粒对小鼠特异性体液免疫功能的影响(血清溶血素测定法)

3.4.3 LY与陆英颗粒对特异性细胞免疫功能的影响(胎儿脾淋巴转化试验)

4 讨论

4.1 对小鼠急性肝损伤的保护作用

4.2 LY与陆英颗粒抗慢性肝损伤作用

4.2.1 营养不良,乙醇,CCl_4合并复合因素致大鼠肝纤维化

4.2.2 免疫性肝损伤的影响

4.3 利胆退黄作用

4.4 调节免疫功能

第五章 展望

1.关于陆英的有效成分

2.关于陆英的保肝作用及机制

结论

参考文献

附图

致谢

论文发表情况

发布时间: 2006-12-14

参考文献

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