蒙古羊和滩羊H-FABP基因、PPAR-γ基因与IMF的变化规律及其相关性研究

论文摘要

近年来,世界各国的肉品消费量越来越大,而且已经出现一种由单纯的重视数量向重视质量方向发展。所以,畜牧生产应该顺应这种趋势,对生产方式方法进行相应的调整,以追求更高的社会效益和经济效益。本研究针对当前羊肉品质存在的品质不理想的问题,以肌内脂肪含量为突破口,从心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）基因mRNA的表达量出发,探讨其在我国两个绵羊品种中的表达量变化趋势以及其对羊肉肌内脂肪含量的影响。力求为今后的育种工作提供一定的理论基础。选取相同饲养条件的滩羊和蒙古羊各12只分别于90、120、160和200日龄进行屠宰。用半定量RT-PCR方法分别测定每个个体背最长肌中的心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因的相对表达含量及其肌内脂肪含量（IMF）,分析其发育规律及其之间的相关性。结果表明:（1）滩羊IMF第二阶段比第一阶段含量高,第二阶段之后变化不明显,第一阶段和其它各阶段差异显著（P<0.05）;（2）蒙古羊随日龄增加,肌内脂肪含量不断升高,但是各阶段差异不显著;（3）两个品种绵羊的H-FABP基因相对表达量随着日龄升高而升高,在160日龄达到最高后开始下降。其中,滩羊160日龄与前两阶段差异显著（P<0.05）,蒙古羊160日龄与其它三阶段均差异显著（P<0.05）;（4）滩羊PPAR-γ基因相对表达含量变化规律不明显,但在160日龄相对表达量最高,与其它阶段差异显著（P<0.05）。蒙古羊随着日龄增加而降低,在160日龄后开始升高,各阶段差异不显著;（5）蒙古羊第一阶段到第三阶段（90-160日龄）期间H-FABP基因与IMF相关系数为0.988（P=0.068）,蒙古羊第一阶段到第三阶段（90-160日龄）期间PPAR-γ基因与IMF相关系数为-0.8849（P=0.1084）。通过本试验我们得知,在一定生长时期内,我国某些地方品种中,一些重要的影响肉质性状的基因对其肌内脂肪的影响特别明显,应该引起育种工作者的高度重视。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 肉羊遗传改良与羊肉品质的研究进展
• 1.1 肉质的概念
• 1.2 肌肉的组织结构
• 1.3 肌肉的化学组成
• 1.4 肌间脂肪
• 1.5 肌内脂肪
• 1.6 影响肌内脂肪含量的候选基因
• 1.7 脂肪酸结合蛋白基因
• 1.7.1 脂肪组织脂肪酸结合蛋白基因
• 1.7.2 心肌脂肪酸结合蛋白基因
• 1.8 过氧化氢酶体激活增殖受体基因
• 1.8.1 过氧化氢酶体激活增殖受体PPARα
• 1.8.2 过氧化氢酶体激活增殖受体PPARβ
• 1.8.3 过氧化氢酶体激活增殖受体PPARγ
• 1.8.4 过氧化氢酶体激活增殖受体PPARδ
• 1.9 绵羊H-FABP 及PPARγ基因的研究
• 1.10 影响试验成功的要素
• 1.10.1 总RNA 的提取策略
• 1.10.2 影响RT-PCR 成功的要素
• 1.10.3 三种逆转录引物的选择
• 1.10.4 模板量和反应循环数
• 1.10.5 Mg2+对效率的影响
• 1.11 定量表达的方法和原理
• 1.12 半定量PCR 的研究进展
• 1.13 选题的目的和意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 屠宰和采样
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.1.4 肌内脂肪含量测定仪器
• 2.1.5 分子试验主要溶液试剂配制
• 2.1.6 肌内脂肪含量测定试剂
• 2.1.7 工具酶及试剂盒
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 总RNA 的提取
• 2.2.2 总RNA 的鉴定
• 2.2.3 总RNA 的反转录
• 2.2.4 目的RNA 的半定量表达
• 2.2.5 相对表达量的测定
• 2.2.6 肌内脂肪含量的测定
• 2.3 目的基因与肌内脂肪含量相关性的研究
• 第三章 结果与分析
• 3.1 总RNA 的鉴定结果
• 3.2 PCR 反应条件的优化
• 3.2.1 H-FABP 基因、PPARγ基因及持家基因的退火温度优化
• 3.2.2 H-FABP 和PPARγ基因M92+浓度优化
• 3.2.3 H-FABP 基因、PPARγ基因及β-actin 基因的扩增循环数优化
• 3.3 绵羊 H-FABP 及 PPARγ基因 PCR 半定量表达分析结果
• 3.4 肌内脂肪含量的测定结果
• 3.5 IMF 含量与 H-FABP 和 PPAR-γ 基因相对表达量的相关性分析
• 第四章 讨论
• 4.1 绵羊总 RNA 提取及 RT-PCR 的反应条件
• 4.2 绵羊肌内脂肪含量发育性变化
• 4.3 IMF 含量与H-FABP、PPAR-γ基因相对表达量的相关性关系
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介