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转移抑制基因BRMS1在人乳腺癌细胞株生物学功能与作用机制的实验研究

2020-12-03阅读(699)

转移抑制基因BRMS1在人乳腺癌细胞株生物学功能与作用机制的实验研究

论文摘要

目的:研究转移抑制基因BRMS1在人乳腺癌细胞株的生物学功能与作用机制方法:通过RT-PCR扩增人BRMS1基因的开放阅读框（open reading frame,ORF）并克隆进真核表达载体pcDNA3.1（+）,通过限制性内切酶（EcoRⅠ和HindⅢ）酶切及DNA序列分析进行鉴定。采用实时,半定量RT-PCR方法检测肺高低转移潜能乳腺癌细胞系BRMS1的表达,对BRMS1低表达的细胞进行BRMS1 cDNA的稳定转染,以构建BRMS1稳定过表达的MDA-MB-231肺高转移潜能细胞（2m4-BRMS1）来观察BRMS1对乳腺癌细胞生物特性的影响,体外实验中,观察BRMS1过表达对细胞生物学行为的影响;体内实验中,首先建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,观察移植瘤生长曲线和肺表面转移灶。为探讨其抑制转移机制,用百日咳毒素预处理细胞,来研究BRMS1对细胞运动的影响;利用放射免疫的方法检测BRMS1对细胞内第二信使cAMP含量的影响。为探讨BRMS1对化疗药物敏感性的影响,选择化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）,阿霉素（ADM）,泰素蒂（Docetaxel）进行体外药敏实验,结果:成功构建BRMS1真核表达载体。体外实验的结果发现,转染BRMS1后,肿瘤细胞的形态发生了改变,细胞有皱缩,变圆的趋势,细胞的伪足,微绒毛明显减少;细胞的增殖能力,细胞周期及凋亡未见明显改变;细胞的侵袭能力及运动能力明显下降。体内实验结果发现,转染BRMS1后对移植瘤的出现的时间,生长速度,肿瘤体积大小方面与对照组均无差异,但其出现肺转移率明显少于对照组,其转移灶的体积和数目也明显少于对照组。用PTX预处理后,BRMS1抑制肿瘤细胞运动的能力被取消;BRMS1可使肿瘤细胞内cAMP含量明显增加;BRMS1改变连接蛋白Cx的表达类型,可以上调连接蛋白Cx26 mRNA的表达,而对Cx32,Cx43 mRNA的表达无影响。对选择的化疗药物,BRMS1对化疗药物的敏感性没有明显影响。结论:BRMS1不影响细胞的增殖和凋亡,而通过改变细胞的形态,改变连接蛋白Cx的表达类型,可以上调连接蛋白Cx26的表达,通过与G蛋白偶联的cAMP的信号通路改变肿瘤细胞的运动和侵袭的生物学行为,进而发挥其抑制肿瘤转移功能。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言
  • 第一部分:BRMS1真核表达载体的构建及鉴定
  • 材料和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第二部分:BRMS1对人乳腺癌细胞株生物特性的影响及其可能作用机制
  • 材料和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第三部分:BRMS1对化疗药物敏感性的影响
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 学术会议
  • 发表和拟发表的文章
  • 附录

    • 相关论文文献

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