牛催乳素载体在小鼠细胞系中的表达

论文摘要

催乳素（Prolactin, PRL）存在于所有已知的脊椎动物中,是哺乳动物乳腺发育和泌乳不可或缺的因子。PRL能促进多种乳蛋白的合成。研究证明bPRL可以有效增加外源基因在哺乳动物细胞中的表达。本实验克隆得到牛催乳素启动子（PRLP）,包含bPRL转录起始位点5’端上游2.2kb的调控序列,其中包括了对bPRL基因高效表达至关重要的-1124至-985bp区域。本实验使用全长9.4kb的牛催乳素基因组序列（GenBank登录号:AF426315）作为目的基因,分别构建了以CMV启动子（人巨细胞病毒启动子,长800bp）、PRLP启动子（牛催乳素基因启动子,长2.2kb）和P1A3启动子（山羊β-酪蛋白基因启动子,长6.7kb）三种不同启动子启动的牛催乳素真核细胞表达载体。本实验将上述三种牛催乳素表达载体分别转染AtT20（小鼠垂体瘤细胞株）和HC11（小鼠乳腺上皮细胞株）,通过RT-PCR和定量RT-PCR分析了三种启动子指导下游牛催乳基因在两种不同细胞系中的表达效果。pCMV在两种细胞中有效表达bPRL;pPRLP在两种细胞中的表达效果与pCMV接近;pP1A3不在垂体细胞中表达,在乳腺细胞中表达。本实验同时使用上述牛催乳素表达载体制备了转基因小鼠。稳定整合的牛催乳素基因能够通过生殖细胞向子代传递。其中一只母鼠通过与人转铁蛋白（TF）转基因小鼠配种,获得一只bPRL++TF+双重杂合子小鼠。本实验通过分析不同启动子载体在不同类型细胞中的表达水平,在细胞水平上比较不同启动子对于牛催乳素表达的调控作用。本课题的结果有助于探讨利用牛催乳素提高乳腺生物反应器中外源基因表达水平的可行性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 牛催乳素真核表达载体的构建和鉴定
• 1.1 CMV（人巨细胞病毒启动子）启动牛催乳素真核表达载体的构建和鉴定
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 方法
• 1.1.3 结果
• 1.2 bPRLP（牛催乳素基因启动子）牛催乳素真核表达载体的构建和鉴定
• 1.2.1 材料
• 1.2.2 方法
• 1.2.3 结果
• 1.3 P1A3（山羊β－酪蛋白基因启动子）牛催乳素真核表达载体的构建和鉴定
• 1.3.1 材料
• 1.3.2 方法
• 1.3.3 结果
• 1.4 讨论
• 第二章 牛催乳素真核表达载体在哺乳动物细胞中的瞬时表达
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 第三章 牛催乳素基因转基因小鼠的制备
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述催乳素研究进展
• 附录1：牛催乳启动子测序结果
• 附录2：缩略语和符号说明
• 攻读学位期间录用、发表和投稿的学术论文目录
• 致谢