应用载药微球局部化疗治疗胃癌的实验性研究

论文摘要

目的:探讨应用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）聚乳酸（Polylactic acid,PLA）载药微球对荷瘤裸鼠进行局部化疗的缓释性,减毒增效的作用以及对胃癌细胞MGC-803增殖和凋亡的影响,为临床应用提供实验依据。方法:应用MGC-803胃癌细胞系制备局部胃癌荷瘤模型,选择肿瘤生长良好的32只重度联合免疫缺陷小鼠（Sever Combined Immunodeficient Mice,SCIDMice）,随机分为5-Fu纯药组（T）、5-Fulμm治疗组（T1）、5-Fu5μm治疗组（T5）以及生理盐水对照组（C）4组,每组8只,按组分别局部注入5-Fu纯药、5-Fu1μm微球、5-Fu 5μm微球及生理盐水。应用放射性同位素示踪技术观察5-Fu微球在体内的分布情况及缓释性;按预先设计的时间点观察荷瘤裸鼠及肿瘤的生长状况,评价药物的疗效;应用免疫组化的方法,评价药物对肿瘤组织凋亡和增殖的影响。结果:1.成功建立局部胃癌荷瘤模型,应用放射性同位素示踪技术观察局部注射5-Fu微球即时及18小时后药物聚集在注射部位,提示药物自微球持续缓释,全身几乎无吸收。2.接种MGC-803人胃癌移植瘤1周后,C组自行觅食、觅水较正常裸鼠明显减少,体重逐渐下降,精神萎靡不振,T组裸鼠经治疗后肿瘤直径明显减少,抑瘤率为35.80%,但是裸鼠的一般情况较差,且半数以上于两周内死亡。T5组治疗后情况与T1组相似,裸鼠行动正常,体毛光滑,自行觅食、觅水较正常,体重无明显下降趋势。一直存活至实验结束,两组在治疗初期肿瘤体积呈下降趋势,后期（4-5周）由于微球释放的药物浓度逐渐变低使肿瘤组织再次生长,但与对照组相比对肿瘤的生长起到明显的抑制作用,T1组和T5组抑瘤率分别为19.24%和19.75%;且T1、T5组平均肿瘤质量与C组相比差异均有统计学意义（q值分别为10.96,11.24,均P＜0.05）,但T1与T5之间无统计学差异（q值为0.28,P≥0.05）。3.实验6周后将小鼠处死,取瘤体组织石蜡包埋,切片,HE染色,光镜观察:T1组及T5组可见肿瘤坏死,细胞溶解,细胞核呈碎片状,可见一些带有凋亡形态特征的肿瘤细胞,即细胞核染色质浓缩、边缘化,有的呈新月体样,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态;TUNEL染色阳性细胞,即凋亡细胞。荧光显微镜观察其细胞为绿色荧光,位于胞核,呈小圆形、环行或颗粒状。在T1组及T5组可见阳性细胞均匀散在分布,而在C组中阳性细胞明显减少;染色观察TUNEL阳性细胞呈棕黄色,主要位于胞核内,且多有胞核形态改变,体积变小、呈新月体样。与C组凋亡指数（2.86±0.52）%相比,T1组及T5组凋亡指数分别为（29.93±2.86）%和（31.27±2.01）%,与C组相比,两组数据差异均具有统计学意义（P＜0.05）,但T1组及T5组凋亡指数差异无统计学意义（P≥0.05）。4.ki-67免疫组化染色检测肿瘤增殖情况,C组ki-67免疫组化染色阳性颗粒呈棕黄色,定位于胃癌细胞核,背景干净,核界清晰,T1组及T5组可见ki-67免疫组化染色阳性颗粒明显减少与空白对照组增殖指数（51.39±2.15）%相比,T1组及T5组增殖指数分别为（26.59±1.66）%和（27.96±2.21）%,与C组相比,两组数据差异均具有统计学意义（P＜0.05）,但T1组及T5组凋亡指数差异无统计学意义（P≥0.05）。结论:5-Fu微球浓集于局部作用于肿瘤组织,全身几乎无扩散吸收,故可明显降低扩散吸收造成的全身毒副作用。而且5-Fu聚乳酸缓释微球在局部肿瘤组织具有明显的缓释作用。C组肿瘤组织呈持续增长,T组肿瘤增长在前2周虽然得到明显抑制,但全身毒副作用大,该组半数以上裸鼠均于第2周内死亡,更体现出5-Fu的毒性作用,然而T1、T5组肿瘤组织在局部注药后4～5周内得到持续抑制,且全身毒副作用较小荷瘤裸鼠全部生存至实验结束;胃癌细胞在体内自发凋亡率较低,5-Fu聚乳酸载药微球局部化疗可以明显诱导胃癌细胞凋亡的发生;C组胃癌ki-67阳性细胞弥漫分布,T1、T5组ki-67指数显著下降,提示5-Fu聚乳酸载药微球局部化疗对胃癌细胞增殖活性有较强的抑制作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 一、载药微球的释放研究
• 1.前言
• 2.实验部分
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 二、5-氟尿嘧啶聚乳酸微球体内抑瘤观察
• 1.前言
• 2.实验部分
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 三、5-氟尿嘧啶聚乳酸微球体外抑瘤观察
• 1.前言
• 2.实验部分
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 5-氟尿嘧啶聚乳酸载药微球用于胃癌治疗的研究
• 综述
• 5-氟尿嘧啶用于肿瘤化疗的新进展
• 综述参考文献
• 致谢