影响富血小板血浆活性的相关因素分析

论文摘要

目的:富血小板血浆（platelet-rich plasma, PRP）的活性与血小板的浓度和活性密切相关。本课题通过研究不同离心、储存方法对血小板计数及活性的影响,同时分析不同激活剂对PRP凝固及释放生长因子的影响,探讨PRP的最佳制备、储存方法及激活剂的使用,为动物实验和临床应用研究提供理论和实验依据。方法:采用四种离心方法（方法一:一次离心力200g,二次离心力200g;方法二:一次离心力200g,二次离心力1200g;方法三:一次离心力1200g,二次离心力200g;方法四:一次离心力1200g,二次离心力1200g）制备PRP,通过血小板计数和ELISA法分别检测PRP中血小板浓度和血浆P选择素浓度。选择22℃和-80℃储存制备的PRP,通过血小板计数和ELISA法检测不同温度储存24h后PRP中血小板浓度和血浆P选择素浓度。血浆P选择素浓度用相应血小板计数进行归一化。分别以壳聚糖、凝血酶受体激动剂肽6（TRAP）和牛凝血酶作为激活剂,测定富血小板凝胶（platelet-rich gel, PRG）的体外凝固时间和血块凝缩率,并通过ELISA法测定释放的生长因子TGF-β1和PDGF的浓度。数据采用SPSS 11.0软件,行单因素方差分析。结果:不同离心方法制备的PRP中,血小板计数明显高于全血,分别是全血血小板计数的4.21,4.94,4.12,4.72倍。其中方法二的血小板计数最高,与方法一、三之间的差异有显著性意义（P<0.01）。PRP中归一化血浆P选择素浓度,方法二和四之间无显著性差异（P>0.05）,但明显低于方法一和三（P<0.01）。采用方法二制备的新鲜PRP以及经过22℃及-80℃储存24h后PRP的血小板计数无显著性差异（P>0.05）。归一化后血浆P选择素浓度22℃储存和新鲜PRP相比无显著性差异（P>0.05）;但-80℃储存明显高于新鲜PRP（P<0.05）。牛凝血酶组PRG凝固时间明显低于TRAP组和壳聚糖组（P<0.01）。加入激活剂后1h,2h,4h后,牛凝血酶组血块凝缩率明显大于TRAP组和壳聚糖组（P<0.05）。24h时,三组PRG血块凝缩率无显著性差异（P>0.05）。牛凝血酶组、壳聚糖组和TRAP组分泌的TGF-β1浓度和总量没有显著性差异（P>0.05）;TRAP组血浆PDGF浓度和总量明显高于牛凝血酶组和壳聚糖组（P<0.05～0.01）。结论:采用一次离心力200g 10分钟,二次离心力1200g 10分钟的二次离心法制备的PRP,血小板浓度和回收率高,避免了离心过程导致的血小板聚集,可能是PRP制备较有效的方法。22℃储存的PRP中血小板浓度较高,归一化后血小板活化率小,是较理想的储存PRP的方法。TRAP作为激活剂与壳聚糖和牛凝血酶相比,是可行的,能够提供更长的工作时间,释放更多的生长因子。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 不同离心方法制备富血小板血浆对血小板浓度及其活性的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 不同温度储存富血小板血浆对血小板浓度及其活性的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 不同激活剂激活富血小板血浆的实验研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢