杨盘二孢菌激发子的研究

论文摘要

本实验从杨盘二孢菌菌丝和滤液中获得了两种激发子粗提物。对它们处理杨树中过氧化物酶（POD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）的诱导活性进行了研究,以及对两种激发子物质的生物活性和稳定性、及在不同植物过敏性反应进行了研究;最后对激发子物质进行了初步纯化和分离。主要研究结果如下: （1）用乙醇沉淀法和细胞破壁法分别从杨盘二孢菌的培养滤液和菌丝中获得两种激发子粗提物,并用蒽酮法和考马斯亮蓝法分别测定其中糖和蛋白质的含量,发现滤液激发子粗提物（CFE）糖和蛋白的含量分别为41.07mg/ml 和40mg/ml,而菌丝激发子粗提物（CME）糖和蛋白含量分别为48.07 mg/ml 和55mg/ml。并且用不同浓度的两种激发子粗提物处理不同杨树,测定POD 和PAL 的活性变化,发现二者均有诱导活性增强的作用,且随着浓度的升高,活性明显提高。（2）对两种激发子的生物活性进行了测定,结果表明:菌丝激发子粗提物在诱导烟草叶片产生过敏反应的有效浓度处于8.01mg/ml 至48.07mg/ml（葡萄糖当量）之间,而滤液激发子粗提物诱导烟草叶片产生过敏反应的有效浓度处于6.85mg/ml 至41.07mg/m（l葡萄糖当量）之间。（3）对烟草过敏性细胞死亡检测结果表明,菌丝激发子粗提物处理在20h时,处理部位细胞全部死亡;而滤液激发子粗提物处理在24h时,处理部位细胞全部死亡。（4）滤液激发子粗提物对温度不敏感而对碱性条件敏感,菌丝激发子粗提物对酸碱不敏感而对温度敏感。滤液激发子粗提物对温度不敏感的特性,将有利于对该激发子的开发和应用。（5）两种激发子粗提物在分别用去针头注射法处理烟草、辣椒和茄子叶片,24h 后烟草上出现过敏性反应。随着时间延长,烟草上过敏性斑扩大,而辣椒和茄子上没有任何反应。表明这两种激发子在诱导过敏反应方面具有一定的选择性。（6）用两种激发子粗提液处理感病杨树和抗病杨树品种的叶片,发现抗病杨树的酶活性变化较为明显,说明两种激发子均是专化性激发子。（5）用Sephadex G-100 柱层析的方法初步纯化两种激发子,并且将菌丝激发子粗提物过柱后得到两个活性组分J14 和J25;滤液激发子粗提物过柱后获得两个活性组分L9和L16。将4 个组分进行的烟草叶片过敏反应和诱导895-杨酶活性的变化,结果表明通过这一系列的生物测定,表明菌丝激发子强活性物质集中在J14 组分;而滤液激发子强活性物质集中在L9 组分。（6）经过SDS-PAGE 垂直板电泳分析发现,通过图谱发现,L9 和J14 的泳道中没有蛋白质带,说明两种激发子并不是蛋白类激发子,很可能是其他类型激发子。

论文目录

• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 植物病害诱导抗病性
• 1.2 诱导植物抗病的激发子研究
• 1.2.1 生物源激发子
• 1.2.2 非生物源激发子
• 1.2.3 专化性激发子和非专化性激发子
• 1.2.4 激发子诱导植物抗病的机制
• 1.2.5 结束语
• 第二章 杨盘二孢菌激发子活性物质存在部位的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 使用的培养基
• 2.1.2 杨盘二孢菌及其活化
• 2.1.3 杨盘二孢菌分生孢子悬浮液获得
• 2.1.4 菌丝悬浮液和培养滤液获得
• 2.1.5 试验材料的采集及处理
• 2.1.6 过氧化物酶活性的测定
• 2.2 结果与分析
• 2.3 小结与讨论
• 第三章 杨盘二孢菌激发子活性物质提取与重要防御酶的测定
• 3.1 材料的准备
• 3.1.1 供试病原菌——杨盘二孢菌的准备
• 3.1.2 供试植物——杨树的准备
• 3.1.3 主要试剂
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 两种激发子粗提物的获得
• 3.2.2 两种激发子粗提物糖和蛋白含量的测定
• 3.2.2.1 两种激发子粗提物糖含量的测定
• 3.2.2.2 两种激发子粗提物蛋白质含量的测定
• 3.3 激发子粗提物对重要防御酶诱导活性的测定
• 3.3.1 杨树叶片的采样和处理
• 3.3.2 两种激发子粗提物处理对杨树叶片的POD 活性影响
• 3.3.3 两种激发子粗提物处理对杨树叶片的PAL 活性的影响
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 两种激发子粗提物糖的含量
• 3.4.2 两种激发子粗提物蛋白质含量
• 3.4.3 两种激发子粗提物处理杨树POD 活性的影响
• 3.4.4 两种激发子粗提物处理杨树PAL 活性的影响
• 3.5 小结与讨论
• 第四章 两种激发子粗提物的生物活性和稳定性的研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 两种激发子粗提物的生物活性的测定
• 4.1.1.1 供试植物
• 4.1.1.2 SA和粗激发子不同浓度在不同植物上的过敏性反应的测定
• 4.1.1.3 激发子粗提物在杨树上专化性的测定
• 4.1.2 两种激发子粗提物稳定性的测定
• 4.1.2.1 不同pH 值的酸碱对激发子生物活性的影响
• 4.1.2.2 两种激发子粗提物的热稳定性的测定
• 4.1.3 激发子处理烟草叶片细胞死亡动态的测定
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 不同浓度水杨酸（SA）和粗激发子在不同植物上的过敏性反应的测定
• 4.2.2 激发子粗提物在杨树上专化性的测定
• 4.2.3 pH 值和温度对两种激发子粗提物生物活性的影响
• 4.2.4 两种激发子粗提物处理烟草细胞死亡动态的测定
• 4.3 小结与讨论
• 第五章 两种激发子粗提物的初步纯化及生物测定
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 两种激发子粗提物的提取
• 5.1.2 杨盘二孢菌的培养
• 5.1.3 895-杨的培养
• 5.1.4 两种激发子粗提物的初步纯化与生物测定
• 5.1.4.1 凝胶的膨胀与浮选
• 5.1.4.2 装柱与上样
• 5.1.4.3 烟草上的表达
• 5.1.4.4 洗脱峰的酶活性的测定
• 5.1.5 SDS-PAGE 垂直板电泳
• 5.1.6 强活性组分的液质联用测定
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 两种激发子粗提物Sephadex G-100 的分离
• 5.2.2 收集的两种激发子洗脱液在烟叶上的表达
• 5.2.3 洗脱峰诱导895-杨酶活性的测定
• 5.2.4 SDS-PAGE电泳图谱分析
• 5.2.5 质谱分析
• 5.3 小结与讨论
• 第六章全文总结与讨论
• 参考文献
• 详 细 摘 要