论文摘要
第一部分shRNA沉默PLCε基因对肾癌786-0细胞增殖的抑制作用目的:探讨经短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）干扰技术沉默磷脂酶Cε（phospholipase C epsilon, PLCε）基因表达后对肾癌786-0细胞增殖的抑制作用。方法:经脂质体介导重组质粒（pGenesil-PLCε）和空质粒（pGenesil-NP）转染786-0细胞后,通过RT-PCR检测PLCεmRNA的表达;MTT法检测转染重组质粒后对细胞增殖的抑制率;流式细胞术分析转染重组质粒后细胞周期的变化。结果:转染重组质粒后可明显抑制PLCεmRNA的表达,其抑制率为69.7%;转染24h、48h和72h后细胞增殖抑制率分别为21.2%,31.6%和32.7%;流式细胞术结果显示转染重组质粒后细胞周期的分布发生了改变,G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,细胞阻滞于G0/G1期,并出现了亚二倍体“凋亡峰”。结论:经RNA干扰技术阻断PLCε基因表达后可明显抑制肾癌786-0细胞增殖,并使细胞周期分布发生改变,细胞增殖减缓,提示PLCε可作为肾癌基因治疗的分子靶点,为针对PLCε基因进行肿瘤生物治疗研究奠定了理论基础。第二部分shRNA沉默PLCε基因抑制肾癌细胞增殖作用的机制目的:探讨经shRNA沉默PLCε基因表达抑制肾癌细胞增殖的作用机制。方法:采用RT-PCR和免疫细胞化学法分析转染重组质粒后P27和Ki67的表达情况。结果:RT-PCR和免疫细胞化学结果表明P27表达均上调,而Ki67表达均下调。结论:利用RNA干扰技术阻断PLCε基因表达可抑制肾癌细胞的增殖,其作用机制可能是诱导P27表达上调,使细胞周期阻滞于G1期;Ki67表达下调,细胞增殖减缓所致。本研究结果丰富了对肾癌分子发病机制的认识,对通过干预肾癌的分子靶点来实现对肿瘤的治疗提供了有力的理论依据。
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