慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定前后外周血T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T细胞及细胞因子的变化

论文摘要

目的:观察慢性乙型肝炎（Chronic Hepatitis B, CHB）患者应用拉米夫定抗病毒治疗前后外周血T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+ CD25+ Tregs）、及IL-10、IFN-γ水平的变化,探讨拉米夫定抗病毒疗效与患者免疫指标变化之间的关联性及意义。方法:收集2009年1月-2010年2月在我院及石家庄市第五医院门诊及住院应用拉米夫定100mg/日抗病毒治疗的CHB患者90例,男66例,女24例;入选患者6个月内未应用其他药物抗病毒及免疫调节治疗。CHB患者均符合2000年（西安）全国传染病与寄生虫病学会制定的病毒性肝炎诊断标准及抗病毒适应症。应用全自动生化分析仪检测血清ALT水平;酶联免疫法检测HBV血清学标志物:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb;定量PCR分析检测HBV DNA载量。并检测抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV、抗-HIV,以除外其它嗜肝病毒及HIV感染。外周血CD4+CD25+Tregs频率的测定:取外周肝素抗凝血,应用CD4、CD25免疫荧光抗体染色,红细胞裂解液溶解红细胞,完全溶血后加0.02M磷酸盐缓冲液洗涤,应用加多聚甲醛-磷酸盐缓冲液固定,重新悬浮细胞,上流式细胞仪检测,淋巴细胞设门,分析CD4+T细胞中CD4+ CD25+ T细胞的百分比。外周血CD4+T细胞及CD8+T细胞的测定:取外周肝素抗凝血,应用CD4、CD8免疫荧光抗体染色,红细胞裂解液溶解红细胞,完全溶血后加0.02M磷酸盐缓冲液洗涤,应用加多聚甲醛-磷酸盐缓冲液固定,重新悬浮细胞,上流式细胞仪检测,淋巴细胞设门,分析CD4+T、CD8+T细胞占淋巴细胞的比例。血清IL-10、IFN-γ水平检测:采用双抗体夹心ELISA法检测IL-10、IFN-γ水平,严格按照操作说明进行。应用SPSS 17.0统计软件对实验数据进行分析,所有数据采用均数±标准差表示,组内总体均数比较采用方差齐性的单因素方差分析或Dunnett’s检验,组内治疗前后两时段均数比较采用配对t检验。相关性分析采用Spearman秩相关检验。结果:1.拉米夫定治疗慢性乙型病毒性肝炎抗病毒疗效: 90例慢性乙型肝炎患者在服用拉米夫定52周后,根据抗病毒疗效分为以下三组:1.完全答组:HBeAg、HBV-DNA阴转、ALT复常;2.部分应答组:HBeAg、HBV-DNA、ALT中有一项或二项未达到完全应答标准;3.无应答组:HBeAg、HBV-DNA、ALT三者均未达到完全应答标准。本组病例中完全应答组32例,部分应答组43例,无应答组15例。2.各组免疫指标变化情况:完全应答组:抗病毒第52周时,CHB患者T淋巴细胞亚群CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+较治疗前明显升高。随着抗病毒时间的延长,CHB患者外周血CD4+CD25+Tregs频率逐步下降,IFN-γ水平、IFN-γ/IL-10逐步上升,IL-10水平逐步下降。部分应答组:抗病毒第52周时,CHB患者T淋巴细胞亚群CD4+T细胞、及CD4+/CD8+较治疗前升高, CD8+T细胞较治疗前无明显差异。随着抗病毒时间的延长,外周血CD4+CD25+Tregs频率逐步降低,IFN-γ水平、IFN-γ/ IL-10逐步上升,IL-10水平逐步下降。无应答组:抗病毒第52周时,CHB患者T淋巴细胞亚群:CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+较治疗前无明显变化。随着抗病毒时间的延长,CHB患者外周血CD4+CD25+Tregs频率及IFN-γ水平、IFN-γ/IL-10、IL-10水平较治疗前无明显变化。3.拉米夫定治疗过程中HBVDNA水平变化:治疗12周时,32例完全应答患者HBV DNA水平均降至5×102拷贝/ml以下。43例部分应答患者12例（27.9%）HBV DNA水平降至5×102拷贝/ml以下,其余患者HBVDNA水平在1.26×1038.23×104拷贝/ml。15例无应答患者HBV DNA水平在7.26×1051.23×107拷贝/ml。治疗24周时,43例部分应答患者14例（32.6%）HBVDNA水平降至5×102拷贝/ml以下。治疗36周时,43例部分应答患者16例（37.2%）HBVDNA水平降至5×102拷贝/ml以下。治疗52周时,43例部分应答患者15例（34.8%）HBVDNA水平降至5×102拷贝/ml以下。4.拉米夫定治疗过程中ALT水平变化:治疗12周时,32例完全应答患者中30例（94.6%）ALT降至40U/L以下,43例部分应答患者中14例（32.5%）ALT降至40U/L以下。治疗24周时,完全应答患者全部降至40U/L以下,43例部分应答患者中18例（41.9%）ALT降至40U/L以下。治疗36周时,43例部分应答患者中19例（44.2%）ALT降至40U/L以下。治疗52周时,43例部分应答患者中18例（41.9%）ALT降至40U/L以下。结论:应用拉米夫定抗病毒过程中,完全应答CHB患者外周血CD4+CD25+Tregs、IL-10水平较治疗前明显下降, IFN-γ、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+、IFN-γ/IL-10水平较治疗前明显升高。无应答CHB患者治疗前后以上各免疫指标均无明显变化。治疗前后以上各免疫指标的变化可能与应用拉米夫定后HBV复制被抑制后,HBV对机体免疫功能的抑制作用解除而引起的继发性机体免疫功能提高有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• +CD25⁺调节性T 细胞及细胞因子的变化'>研究论文 慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定前后外周血T 淋巴细胞亚群、CD4⁺CD25⁺调节性T 细胞及细胞因子的变化
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 从慢性乙型肝炎的慢性发病机制谈其免疫治疗策略
• 致谢
• 个人简历