210例肝移植受体HBV活动性复制与巨细胞病毒感染的关系

论文摘要

[前言]国内终末期肝病主要是乙肝相关性的肝硬化、重症肝炎及肝脏肿瘤。乙肝相关性肝移植受体术后常规应用乙肝免疫球蛋白和拉米夫定来降低乙肝复发率。随着拉米夫定的普遍应用，对拉米夫定耐药的情况日益增加，目前肝移植后乙肝复发仍较为常见。人巨细胞病毒（HCMV）为双链DNA病毒，易潜伏于人机体内，在人群中感染率相当高，绝大部分感染者无临床症状。肝移植患者由于机体免疫功能严重受抑制，HCMV的临床感染率明显增加。一旦发生重症HCMV感染，病情进展快，病死率极高。有文献报道移植后前4个月内HCMV活动性感染的发生率为50％—70％，并可导致HCMV相关的排斥反应，这些严重的HCMV疾病是免疫力低下的器官移植受者移植失败与死亡的重要原因，死亡率高达25％。为进一步探索肝移植受体术后HBV活动性复制和HCMV感染是否有相关性，我们采用免疫组化检测法回顾性分析我院210例因乙肝相关性疾病接受肝移植的受者乙肝病毒DNA复制活动性与发生HCMV-PP65抗原血症的关系。[材料和方法]1资料和方法一、对象与方法（1）研究对象210例患者系2000年3月至2006年6月期间由浙医一院收治的乙肝相关性肝移植患者，男性196例，女性14例，平均年龄（44.1±10.6）岁（1～66岁）；其中HBV相关的良性终末期肝病（肝硬化、重症肝炎）140例，肝脏恶性肿瘤70例；术前乙肝DNA阳性者107例，术前CMV pp65抗原血症阳性29例。其中116例患者住院手术期间或术后门诊随访期间曾出现HBV-DNA阳性（＞5×10E3拷贝／ml），设为A组，94例在住院手术及术后门诊随访期间复查HBV-DNA均为阴性，设为B组。HCMV-pp65抗原检测结果为住院手术期间及术后门诊随访期间所检验出的白细胞pp65抗原阳性细胞数检测值。（2）术后免疫抑制方案术后诱导阶段采用CsA或FK506+MMF+激素三联治疗，维持阶段采用小剂量CsA或FK506+激素治疗。对于肾功能不全的患者，先用Zenapax（IL—2受体的单克隆抗体），后以CsA或FK506为主的基本方案。（3）试验方法免疫组化法检测HCMV的pp65抗原阳性细胞数：用已知HCMV肺炎患者的外周血白细胞作阳性对照，以正常人外周血白细胞作阴性对照。光学显微镜下阳性细胞呈棕黄色或棕褐色，阴性细胞呈淡蓝色。检测外周血白细胞，计数5万个白细胞，有5个及以上阳性细胞数即为HCMV抗原血症阳性。移植术前检测1次，术后每周检测1次，出院后至少每月检测1次。HBV-DNA定量测定采用荧光定量PCR方法。（4）试剂和仪器鼠抗人单克隆CMV抗体（克隆号AAC10），显色试剂为EnVisionTM+System，Peroxidase（DAB）购自丹麦DAKO公司；光学成像显微镜为日本产OLYMPUS，型号为BH-2。HBV-DNA定量测定采用荧光定量PCR，扩增仪为美国罗氏公司的Lightcycler定量PCR系统，试剂盒由深圳匹基生物有限公司提供。（5） HCMV感染判定标准若HCMV-pp65抗原阳性细胞数＞5／5万WBC，而无明显临床症状，可判定为HCMV感染；若HCMV-pp65抗原阳性细胞数＞5／5万WBC，且有肺、胃肠道、肝脏等器官受感染的临床症状，则判定为HCMV病。（6） HCMV感染的预防和治疗均采用静脉注射更昔洛韦。预防方案：术后第一天开始静脉注射更昔洛韦，5.0～7.5mg·kg-1·d-1，1次／d，共1个半月。治疗方案：对于单纯CMV感染而无临床症状者，诊断后第一天开始静脉注射更昔洛韦，5.0～7.5mg·kg-1·d-1，1次／d，共3个月；对于发生CMV病的患者，诊断后第一天开始静脉注射更昔洛韦，5.0～7.5mg·kg-1·d-1，2次／d，至临床症状消失后，再改为静脉注射更昔洛韦，5.0～7.5mg·kg-1·d-1，1次／d，总疗程不少于3个月。（7）统计学处理测定所得的数据呈正态分布，计量资料用（?）±s表示；测定所得的数据呈偏态分布作配对秩和检验；数据用SPSS 10.0统计软件包统计分析。二、试验结果1．HCMV-pp65抗原阳性细胞数检测结果：210例受者中138例（65.71％）阳性（HCMV-pp65抗原阳性细胞数＞5／5万WBC）。将两组受者的性别、年龄、病因、移植术前抗原血症是否阳性等因素分别进行t检验分析，未有统计学差异，显示两组数据具有可比性。2．A组与B组HCMV抗原血症阳性率比较：A组116人，其中82人术后出现HCMV的pp65抗原血症，阳性率为70.69％（82／116）；B组94人，其中56人术后出现CMV的pp65抗原血症，阳性率为59.57％（56／94）。两组CMV-pp65抗原血症阳性率有显著性差异（P＜0.05）。3．A组与B组HCMV-pp65抗原阳性细胞数检测结果比较：A组中位HCMV-pp65抗原阳性细胞数检测值5.92／5万WBC，B组中位CMV-pp65抗原阳性细胞数检测值4.43／5万WBC，两者有统计学差异（P＜0.05）。4．210例肝移植患者首次发生HCMV-pp65抗原血症时间平均（18.51±1.91）周（16.5～20.5周）。其中A组首次出现HCMV-pp65抗原血症时间（17.2±2.74）周；B组术后首次出现HCMV-pp65抗原血症的时间（19.03±2.64）周。两组发生时间无统计学差异（P＞0.05）（表2）。5．A组数据取HBV-DNA拷贝数的lg值与HCMV-pp65抗原阳性细胞数检测值行直线回归分析比较，二者之间无显著差异，相关图见表3。6．检测结果列表[结论]1．本文试验结果显示，曾出现过乙肝病毒活动性复制的肝移植患者监测CMV的PP65抗原血症阳性率70.69％（82／116）明显高于乙肝病毒DNA监测值阴性组59.57％（56／94）。监测期间内曾出现过HBV-DNA阳性的患者比监测期间未出现过HBV-DNA阳性患者更有可能发生术后CMV抗原血症阳性，提示HBV活动性复制会增加CMV感染可能。HBV-DNA（+）组发生CMVPP65抗原细胞数均值5.9200高于HBV-DNA（—）组CMVPP65抗原细胞数检测均值4.4348。2．HBV活动性复制，对CMV的PP65抗原血症发生的时间没有显著影响。3．HBV-DNA拷贝数的lg值与CMVPP65检测值之间无明显关系。

论文目录

• 一、背景和目的
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、论文
• 210例肝移植受体 HBV病毒活动性复制与人巨细胞病毒感染的关系
• 五、论文参考文献
• 六、综述
• 七、综述参考文献
• 八、感谢信