论文摘要
目的：研究五肽化合物PLNPK肽对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）的治疗作用，并初步探讨其可能的作用机制。方法：1．建立大鼠AA动物模型；测量各组大鼠的踝关节周长，观察PLNPK肽对AA大鼠原发性及继发性踝关节肿胀的抑制作用；HE染色观察PLNPK肽对AA大鼠关节病理改变的影响；Vimentin、CD68和CD86免疫组化方法观察PLNPK肽对AA大鼠关节滑膜组织中成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes，FLS）的增殖、巨噬细胞浸润和活化的影响。2．应用Ⅱ型胶原酶和胰酶联合消化方法培养AA大鼠关节FLS，建立体外AA大鼠原代关节滑膜细胞培养体系，用MTS法观察PLNPK肽在体外对FLS增殖的影响。提取AA大鼠腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophage，PEMφ）；PLNPK肽作用于PEMφ后，提取培养上清液，与AA大鼠FLS共同孵育，MTS方法观察PLNPK肽对AA大鼠FLS增殖的影响。3．应用MTS法观察PLNPK肽体外对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响。应用MTS法和CD86免疫组化方法观察PLNPK肽体外对正常大鼠PEMφ增殖和活化的影响。应用MTS法和CD86免疫组化方法观察PLNPK肽体外对AA大鼠PEMφ增殖和活化的影响。PLNPK肽作用于AA大鼠PEMφ后，提取培养上清液，应用ELISA方法观察PLNPK肽对巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α和IL-1β含量的影响。PLNPK肽能够明显改善AA大鼠关节的滑膜组织增生、炎细胞浸润及血管翳形成，减轻骨和软骨的损伤。PLNPK肽能够抑制AA大鼠关节滑膜组织中FLS的过度增殖和巨噬细胞的浸润，降低巨噬细胞的活化程度。2．药物浓度为0.4-3.2mg／ml时，PLNPK肽对体外培养的FLS增殖无明显的抑制作用，与阴性对照组比较，差异没有统计学意义。药物浓度为0.8-3.2mg／ml时，PLNPK肽能够间接抑制FLS的增殖，其抑制作用有剂量依赖趋势，与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），抑制率为17.89-35.49％。3．药物浓度为0.8-3.2mg／ml时，PLNPK肽能够明显抑制体外培养RAW264.7细胞的增殖，其抑制作用有剂量依赖趋势，与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），抑制率为21.24-81.68％。药物浓度为1.6-3.2mg／ml时，PLNPK肽能够明显抑制体外培养正常大鼠PEMφ的增殖，与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），抑制率为21.32-77.80％；药物浓度为1.6-3.2mg／ml时，PLNPK肽能够明显减少体外培养正常大鼠PEMφ中CD86阳性的细胞数。药物浓度为0.8-3.2mg／ml时，PLNPK肽能够明显抑制体外培养AA大鼠PEMφ的增殖，其抑制作用有剂量依赖趋势，与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），抑制率为36.41-82.85％；药物浓度为0.4-3.2mg／ml时，PLNPK肽能够明显减少体外培养正常大鼠PEM9中CD86阳性的细胞数。PLNPK肽药物浓度为0.2-3.2mg／ml和0.8-3.2mg／ml时，分别能够抑制体外培养AA大鼠PEMφ分泌IL-1β和TNF-α，抑制作用有剂量依赖趋势，与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），抑制率分别为35.60-94.72％和40.70-79.32％。