本文主要研究内容
作者魏婷婷（2019）在《产碱性蛋白酶菌株BN-2的鉴定及其重组酶的酶学性质表征》一文中研究指出：蛋白酶是能将蛋白质降解为小肽和氨基酸的水解酶,碱性蛋白酶（Alkaline protease,AP）作为在碱性环境下活力较高、稳定性较好的一类蛋白酶,其在洗涤剂、生物修复、废物管理、摄影、诊断等工业中均有应用。微生物源碱性蛋白酶因生产成本低、生产率高可满足工业上的需求,成为碱性蛋白酶生产的重要来源,在微生物中,细菌和真菌是各种碱性蛋白酶的良好来源。目前,芽孢杆菌属细菌如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱性芽孢杆菌等是适用于工业生产的主要产酶菌株。本文主要从自然环境中筛选出一株产酶活性较高的菌株,并对菌株中碱性蛋白酶进行了相关研究。首先,从自然发酵的大豆中分离出一株产蛋白酶活性较高的菌株BN-2,结合形态学、分子生物学鉴定该菌种为Bacillus subtilis subsp.natto BEST195。然后通过CTAB法成功提取了BN-2菌株中基因组DNA,利用PCR技术扩增出该菌株中碱性蛋白酶（Alkaline protease,AP）基因,插入pBE2R载体中,构建成重组表达载体pBE2R-AP,并转染枯草芽孢杆菌WB600进行分泌性表达。以糊精、可溶性淀粉作为碳源,每毫升发酵液中重组蛋白酶的酶活约是出发菌株中蛋白酶酶活的1.2倍。将pBE2R载体中p43启动子替换为BN-2菌株中碱性蛋白酶的p195启动子时,每毫升发酵液中p43启动子调控下的碱性蛋白酶酶活约是p195启动子调控下酶活的1.4倍。以酪蛋白为底物对该重组蛋白酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该酶的最适作用pH为8.0,在pH 8.0缓冲液中保存24 h,剩余酶活力达94%;该酶的最适作用温度为50℃,在50℃中处理30min时残余酶活力降至51%;1mmol/L的Mn2+使该酶活性提高了48%,1mmol/L的Ca2+使该酶活性提高了8%;洗涤剂组分中1%的TritonX-100对该酶活性有13%的抑制作用,1%的Tween20对该酶活性有8%的抑制作用,1%的Tween80对该酶活性有15%的抑制作用。
Abstract
dan bai mei shi neng jiang dan bai zhi jiang jie wei xiao tai he an ji suan de shui jie mei ,jian xing dan bai mei （Alkaline protease,AP）zuo wei zai jian xing huan jing xia huo li jiao gao 、wen ding xing jiao hao de yi lei dan bai mei ,ji zai xi di ji 、sheng wu xiu fu 、fei wu guan li 、she ying 、zhen duan deng gong ye zhong jun you ying yong 。wei sheng wu yuan jian xing dan bai mei yin sheng chan cheng ben di 、sheng chan lv gao ke man zu gong ye shang de xu qiu ,cheng wei jian xing dan bai mei sheng chan de chong yao lai yuan ,zai wei sheng wu zhong ,xi jun he zhen jun shi ge chong jian xing dan bai mei de liang hao lai yuan 。mu qian ,ya bao gan jun shu xi jun ru ku cao ya bao gan jun 、de yi ya bao gan jun 、shi jian xing ya bao gan jun deng shi kuo yong yu gong ye sheng chan de zhu yao chan mei jun zhu 。ben wen zhu yao cong zi ran huan jing zhong shai shua chu yi zhu chan mei huo xing jiao gao de jun zhu ,bing dui jun zhu zhong jian xing dan bai mei jin hang le xiang guan yan jiu 。shou xian ,cong zi ran fa jiao de da dou zhong fen li chu yi zhu chan dan bai mei huo xing jiao gao de jun zhu BN-2,jie ge xing tai xue 、fen zi sheng wu xue jian ding gai jun chong wei Bacillus subtilis subsp.natto BEST195。ran hou tong guo CTABfa cheng gong di qu le BN-2jun zhu zhong ji yin zu DNA,li yong PCRji shu kuo zeng chu gai jun zhu zhong jian xing dan bai mei （Alkaline protease,AP）ji yin ,cha ru pBE2Rzai ti zhong ,gou jian cheng chong zu biao da zai ti pBE2R-AP,bing zhuai ran ku cao ya bao gan jun WB600jin hang fen bi xing biao da 。yi hu jing 、ke rong xing dian fen zuo wei tan yuan ,mei hao sheng fa jiao ye zhong chong zu dan bai mei de mei huo yao shi chu fa jun zhu zhong dan bai mei mei huo de 1.2bei 。jiang pBE2Rzai ti zhong p43qi dong zi ti huan wei BN-2jun zhu zhong jian xing dan bai mei de p195qi dong zi shi ,mei hao sheng fa jiao ye zhong p43qi dong zi diao kong xia de jian xing dan bai mei mei huo yao shi p195qi dong zi diao kong xia mei huo de 1.4bei 。yi lao dan bai wei de wu dui gai chong zu dan bai mei de mei xue xing zhi jin hang le yan jiu ,jie guo biao ming :gai mei de zui kuo zuo yong pHwei 8.0,zai pH 8.0huan chong ye zhong bao cun 24 h,sheng yu mei huo li da 94%;gai mei de zui kuo zuo yong wen du wei 50℃,zai 50℃zhong chu li 30minshi can yu mei huo li jiang zhi 51%;1mmol/Lde Mn2+shi gai mei huo xing di gao le 48%,1mmol/Lde Ca2+shi gai mei huo xing di gao le 8%;xi di ji zu fen zhong 1%de TritonX-100dui gai mei huo xing you 13%de yi zhi zuo yong ,1%de Tween20dui gai mei huo xing you 8%de yi zhi zuo yong ,1%de Tween80dui gai mei huo xing you 15%de yi zhi zuo yong 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自山西大学的魏婷婷，发表于刊物山西大学2019-11-12论文，是一篇关于碱性蛋白酶论文,鉴定论文,工程菌论文,启动子论文,酶学性质论文,山西大学2019-11-12论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自山西大学2019-11-12论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。