抗TMV药剂筛选和BABA诱导抗病性机理的初步研究

论文摘要

本研究建立了基于心叶烟(Nicotiana glutinosa)枯斑计数法和系统寄主普通烟NC89(Nicotiana tabacum cv. NC89)ELISA法的双重抗TMV药剂筛选体系,可高效、准确的对抗植物病毒药剂效果进行筛选。通过对十余种化学药剂和天然植物提取物的筛选,基本确定了BABA和DEM的抗TMV效果。进一步研究结果显示,BABA的最佳作用方式是接种前3天叶面喷施1mM;DEM的最佳作用浓度为100μM。两种药剂分别能达到38.1%和53.8%的病毒抑制效果。 TMV的体外钝化试验验证了BABA并非直接作用于病毒,其表现出对病毒的防治效果很可能来源于其对植物的诱导抗病性作用。利用差异显示技术,共发现了2条能够被BABA诱导改变表达状态的基因片断。其中,4A51在药剂处理后12～36h内表达减弱,核酸比对结果显示,它与矮牵牛控制自交不亲和性状的S基因中的一段有很高的同源性。C31在药剂处理后12～48h内表达增强,基因比对未发现同源性较高的基因。

论文目录

• 缩略词表
• 第一章 引言
• 1.1 烟草与TMV的相互作用
• 1.1.1 感病烟草对TMV侵染的反应
• 1.1.2 抗病烟草对TMV侵染的反应
• 1.2 抗植物病毒药剂研究进展
• 1.2.1 抗植物病毒剂研究的早期工作
• 1.2.2 目前国内市场上的主流抗病毒剂
• 1.2.3 抗病毒剂的作用机理
• 1.3 植物抗病诱导剂B-氨基丁酸研究进展
• 1.3.1 BABA的抗病作用
• 1.3.2 BABA的吸收、运输和代谢
• 1.3.3 BABA可能的作用机制
• 1.4 本文的研究目标与试验方案
• 1.4.1 建立基于心叶烟和普通烟的双重筛选体系
• 1.4.2 筛选有效的抗TMV药剂
• 1.4.3 探索BABA诱导抗病性可能的作用机制
• 第二章 抗TMV药剂筛选
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 毒源
• 2.1.3 酶、试剂及耗材
• 2.1.4 烟草的培养条件及药剂处理方法
• 2.1.5 TMV的接种
• 2.1.6 TMV的提纯
• 2.1.7 TMV抗血清的制备、IgG的纯化
• 2.1.8 ELISA法对TMV的测定
• 2.1.9 Western检测
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 TMV的提纯及检测
• 2.2.2 TMV抗血清的制备、IgG纯化及效价的测定
• 2.2.3 心叶烟枯斑计数法对药剂的初步筛选结果
• 2.2.4 普通烟ELISA法对药剂效果的进一步验证和最佳作用方式筛选
• 2.2.5 对药剂筛选结果的Western验证
• 2.3 讨论
• 2.3.1 双重药剂筛选体系的高效性和准确性
• 2.3.2 枯斑计数对药效评价的理论根据
• 2.3.3 不同药剂的筛选目的
• 2.3.4 BABA和DEM对普通烟的抗TMV效果
• 2.3.5 筛选试验中的误差
• 第三章 BABA诱导抗病性机理研究
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 植物材料、毒源、栽培和处理方法、TMV接种
• 3.1.2 酶、试剂及耗材
• 3.1.3 BABA对TMV体外钝化试验
• 3.1.4 差异显示样品的处理和取样
• 3.1.5 植物总RNA的提取
• 3.1.6 基因表达差异显示（DDRT-PCR）
• 3.1.7 Northern blot对差异片断表达的分析
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 药剂对病毒的体外钝化检测
• 3.2.2 BABA处理对普通烟叶片中基因表达差异的影响
• 3.2.3 4A51和C31在BABA处理下不同时期表达的分析
• 3.3 讨论
• 3.3.1 BABA的诱导抗病性
• 3.3.2 BABA诱导普通烟4A51和C31基因的差异表达
• 3.3.3 差异显示技术研究BABA的诱导抗病性的优缺点
• 结论
• 参考文献
• 致谢