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利用原位杂交技术研究仔猪小肠FcRn表达及分布规律

2020-12-02阅读(576)

利用原位杂交技术研究仔猪小肠FcRn表达及分布规律

论文摘要

为了研究FcRn mRNA在仔猪小肠内的分布和表达,本文建立了地高辛标记探针的原位杂交方法,并且以0d,1d,2d,3d,4d,7d,10d, 14d, 21d, 28d和35d等不同日龄的大白和长白杂交二元仔猪作为研究对象,检测了FcRn mRNA在仔猪小肠内的定位和半定量表达规律。主要结果如下:1.仔猪小肠原位杂交方法的建立:根据GenBank公布的猪FcRn重链（α链）mRNA基因保守序列设计并合成带地高辛标记的原位杂交试验用cDNA探针,确定仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度为14μm;仔猪小肠内存在内源性辣根过氧化物酶,3%的H2O2溶液祛除该酶的效果良好,但在本研究中内源性辣根过氧化物酶的存在试验结果并无明显影响,无需祛除;在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织中均检测到清晰的杂交信号。2.仔猪小肠FcRn mRNA的定位:利用建立好的原位杂交方法,经定位分析检测到粘膜上皮、粘膜固有层和粘膜下层三个部位有FcRn mRNA阳性表达。3.仔猪小肠FcRn mRNA的半定量:不同日龄仔猪小肠FcRn mRNA表达水平为:0d-2d FcRn mRNA表达水平最高,以后逐渐降低,21d之后又逐渐回升;0d已吃乳的表达量明显高于0d未吃乳。不同组织仔猪小肠FcRn mRNA表达水平为:十二指肠和空肠的FcRn mRNA表达水平高于回肠。

论文目录

  • 致谢
  • 摘要
  • 1. 文献综述
  • 1.1 原位杂交组织化学技术的研究进展
  • 1.1.1 原位杂交组织化学技术的原理
  • 1.1.2 原位杂交探针的种类
  • 1.1.2.1 按探针的核酸性质分类
  • 1.1.2.2 按探针的标记物分类
  • 1.1.2.3 按探针的来源分类
  • 1.1.3 原位杂交探针的标记法
  • 1.1.4 原位杂交的关键技术
  • 1.1.4.1 切片制备
  • 1.1.4.2 杂交前处理
  • 1.1.4.3 杂交反应
  • 1.1.4.4 杂交后处理
  • 1.1.4.5 显示
  • 1.1.4.6 对照和结果判断
  • 1.1.5 原位杂交技术的发展
  • 1.2 FcRn 的研究进展
  • 1.2.1 FcRn 的分子结构
  • 1.2.2 FcRn 的生理学功能
  • 1.2.2.1 FcRn 参与 IgG 通过胎盘和卵黄囊的胞转作用
  • 1.2.2.2 FcRn 通过肠上皮转运母体 IgG 分子
  • 1.2.2.3 FcRn 保护循环中的 IgG 免受降解
  • 1.2.2.4 FcRn参与乳腺中对 IgG的胞吞转运
  • 1.2.3 FcRn与 IgG的相互作用
  • 1.2.3.1 FcRn与IgG的结合位点
  • 1.2.3.2 FcRn与IgG的结合模型
  • 1.2.3.3 FcRn 与 IgG 结合的pH 依赖性
  • 1.2.4 FcRn 在哺乳动物体内的表达
  • 1.2.5 FcRn 研究现状和应用前景
  • 1.2.5.1 FcRn 研究现状
  • 1.2.5.2 FcRn 应用前景
  • 2 引言
  • 3 材料与方法
  • 3.1 试验动物及分组
  • 3.2 样品采集
  • 3.3 主要仪器
  • 3.4 主要试剂及配制
  • 3.5 探针的设计和制备
  • 3.6 试验方法
  • 3.6.1 载玻片的处理
  • 3.6.2 冰冻切片的制作
  • 3.6.2.1 切片前的准备
  • 3.6.2.2 组织切片厚度的确定
  • 3.6.3 固定
  • 3.6.4 杂交前处理
  • 3.6.5 预杂交
  • 3.6.6 杂交
  • 3.6.7 杂交后处理
  • 3.6.8 显色和复染
  • 3.6.9 观察
  • 3.6.10 原位杂交效果的检查
  • 3.6.11 数据统计
  • 4 结果与分析
  • 4.1 原位杂交方法的建立
  • 4.1.1 切片最佳厚度的确定
  • 4.1.2 内源性辣根过氧化物酶（HRP）的祛除效果
  • 4.1.3 原位杂交效果
  • 4.2 仔猪小肠 FcRn mRNA 的定位
  • 4.2.1 粘膜上皮的表达
  • 4.2.2 粘膜固有层的表达
  • 4.2.3 粘膜下层的表达
  • 4.3 仔猪小肠 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.1 不同日龄仔猪十二指肠（前、中、后）FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.2 不同日龄仔猪空肠（前、后）FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.3 不同日龄仔猪回肠（前、后）FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.4 0d 未吃乳不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.5 0d 已吃乳不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.6 1d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.7 2d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.8 3d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.9 4d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.10 7d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.11 10d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.12 14d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.13 21d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.14 28d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 4.3.15 35d 不同组织中 FcRn mRNA 的半定量
  • 5 讨论与结论
  • 5.1 讨论
  • 5.1.1 原位杂交方法的建立、应用及其在本研究中的意义
  • 5.1.2 FcRn mRNA 在仔猪小肠的定位表达
  • 5.1.3 FcRn mRNA 在仔猪小肠的半定量表达
  • 5.2 结论
  • 参考文献
  • 英文摘要
  • 发表论文及论著情况

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