鼻咽癌Hedgehog信号通路表达及功能研究

论文摘要

鼻咽癌是一个多因素遗传性的头颈部常见肿瘤，其发生发展具有多阶段性、隐蔽性等特点，是我国常见的恶性肿瘤之一；高发区主要集中在南方五省（广东、广西、湖南、福建、江西），有广东癌之称。尽管由于外科手术以及化疗手段地进步，但由于其发病部位的隐蔽以及检测指标的有效性等问题，导致其诊断、治疗仍存在相当大的困难，多数患者发现病症进行诊断后已是癌症后期；因此，急切需要一种针对于鼻咽癌的比较合理、有效的诊断以及预后手段。Hedgehog（Hh）信号通路发现于果蝇中的一个进化保守的信号通路，最初的功能是调节胚胎发育，随后发现其在人类的多种癌症中异常激活，参与肿瘤的发生、分化、侵袭和转移。然而，对于Hh信号通路是否在鼻咽癌中存在异常表达以及其在鼻咽癌中的功能性影响，目前并不明确。本研究首先运用荧光定量PCR检测了Hh信号通路的PTCH-1、SMO和GLI-1基因在鼻咽癌以及鼻咽炎临床组织中的表达情况。研究显示PTCH-1、SMO和GLI-1基因表达于全部的鼻咽组织中，而荧光定量PCR结果表明PTCH、GLI-1在鼻咽癌组织以及鼻咽炎组织中存在表达差异（P<0.05），PTCH表达下调，GLI-1则表达上调，而SMO基因表达无差异。免疫组织化学检测进一步显示，GLI-1蛋白在鼻咽癌中存在明显上调，上述结果表明Hh信号通路在鼻咽癌中存在导常激活。通过特异性的信号通路抑制剂环巴胺（cyclopamine）对Hh鼻咽癌不同分化程度的细胞系CNE1、CNE2和HNE2的细胞株进行通路功能性干扰。CCK-8细胞增殖实验显示，CNE1、CNE2和HNE2在信号通路受抑制情况下，细胞生长和增殖受到一定程度的抑制。流式细胞仪检测发现，cyclopamine抑制通路导致CNE1、CNE2和HNE2细胞凋亡增加。荧光定量PCR检测通路干扰对目的基因的表达影响发现，下游基因PTCH1、Cyclin E表达下调。本研究结果显示，Hh信号通路在鼻咽癌中存在异常激活，通过对信号通路的干扰研究发现，Hh促进鼻咽癌细胞的增殖及凋亡，并对信号通路的靶标基因表达具有抑制作用。本研究推动实现鼻咽癌从Hh信号通路作为诊断和分子靶标的研究提供新的科学依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1.1 鼻咽癌研究背景
• 1.2 Hedgehog 信号通路与肿瘤
• 1.3 本研究的主要内容和意义
• 第二章 Hedgehog 通路在鼻咽癌中的异常表达
• 2.1 实验材料、试剂和仪器
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 第三章 鼻咽癌 Hh 通路阻断功能研究
• 3.1 实验材料、试剂和仪器
• 3.2 实验方法
• 3.3 结果与分析
• 3.4 讨论
• 第四章 结语与展望
• 4.1 结论
• 4.2 创新点
• 4.3 研究展望
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间文章发表情况
• 缩略词
• 附录
• 致谢