论文摘要
支气管哮喘（bronchial asthma）是一种以气道慢性炎症、气道高反应性及气道重塑为基本病理特征的慢性疾病。气道重塑（airway remodeling）是以气道平滑肌增生肥大、基底膜增厚和上皮下纤维化为基本的病理改变,是不可逆性气道阻塞和持续性气道高反应的重要病理基础。哮喘气道重塑的发生机制比较复杂,目前尚未完全清楚。因此研究哮喘气道重塑的病理特征及发生机制,寻找有效的治疗方法具有重要的意义。碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growthfactor,b-FGF）是一种具有广泛生物学活性的肽类生长因子,具有广泛的细胞增殖效应及诱导血管生成等作用。核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）是一种广泛存在体内的多种细胞的核转录因子,可以通过调节多种因子如生长因子、细胞因子、炎性介质、趋化因子等的生成和活化而致气道重构。本实验旨在通过建立大鼠的哮喘气道重塑模型,研究b-FGF及NF-κ3在大鼠肺内的表达以及二者在哮喘气道重塑的发生机制中的作用,并通过应用布地奈德进行干预,为哮喘的早期干预及治疗提供理论依据。材料与方法1.对象和模型制备方法健康雄性清洁级SD大鼠45只,体重（200±10）g,6～7周龄,随机分为三组:正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、布地奈德干预组（C组）。制备方法:第一天B组和C组每只大鼠分别腹腔注射1ml10%卵蛋白混悬液（内含1ml生理盐水,100mg氢氧化铝,100mg卵蛋白）进行致敏,A组用生理盐水代替卵蛋白,第8天再重复一次;第15天B组和C组开始用卵蛋白激发,将大鼠置于特制密闭玻璃容器中,用压缩雾化器喷入1%卵蛋白液,隔日一次,每次20分钟,共激发21次,A组用生理盐水代替,C组于雾化卵蛋白液半小时后给予雾化吸入布地奈德液进行干预。2.标本采集各组大鼠分别于末次激发后24小时内用苯巴比妥麻醉（100mg/只）下开胸,经右心室插管至肺动脉,用生理盐水快速灌洗后,取右肺中叶,置于10%多聚甲醛内固定24h,酒精梯度脱水,石蜡包埋,选取垂直、平行气道取材,做厚度为5μm的切片,分别做苏木素—伊红（HE）染色和免疫组织化学染色。3.平滑肌厚度及气道上皮厚度测量采用计算机图像分析系统进行分析处理,在高倍镜下.（×400）找相同级别的两个完整的支气管横断面,测量平滑肌厚度和气道上皮厚度,分别取其平均值做为最后的测定结果,单位μm。4.b-FGF、NF-κB表达水平的测定应用计算机图像病理分析系统,在高倍镜（×400）下每张切片随机选取5个具有代表性的视野,分别选取阳性区测量其灰度值,计算其平均灰度值做为最后的测定结果。5.统计学分析采用SPSS15.0统计软件包进行统计学处理,结果以均数±标准差（（?）±s）表示,各组样本均数经过方差齐性检验后,采用单因素方差分析,组间进一步两两比较用LSD法;各因素之间的相关性采用直线相关分析。以α=0.05为检验水准,P＜0.05为差异具有统计学意义。结果1.肺大体标本观察各组大鼠肺脏切面均无肺实质出血和化脓性病灶。哮喘组大鼠肺标本与对照组相比体积增加明显,充血明显,可见间质内有少量的纤维样囊肿。干预组大鼠肺标本上述改变较哮喘组显著减轻。2.HE染色哮喘组大鼠肺组织HE染色可见支气管上皮脱落,粘膜中断、皱襞增加,气道壁厚度增加,管腔狭窄,粘膜下及管壁周围可见大量炎症细胞（以淋巴细胞和嗜酸性粒细胞为主）。干预组大鼠气道上皮细胞偶有脱落,粘膜相对光滑完整。气道壁增厚及炎症细胞浸润情况均较哮喘组明显减轻。对照组大鼠肺组织几乎无上述病理改变。3.免疫组化染色3.1气道平滑肌厚度及气道上皮厚度的比较:哮喘组大鼠气道上皮厚度和平滑肌层厚度与对照组相比明显增加,经布地奈德干预后气道上皮厚度和平滑肌层厚度与哮喘组大鼠比较明显降低,P＜0.05。3.2 b-FGF在大鼠气道壁的表达:b-FGF在大鼠肺内主要表达于气道上皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞和血管壁平滑肌细胞;b-FGF在哮喘组的表达（126.21±6.46）显著高于对照组（106.05±7.67）,P＜0.05;经布地奈德干预后的大鼠肺内的表达（111.61±5.52）明显低于哮喘组大鼠,P＜0.05。3.3 NF-κB在大鼠气道壁的表达:NF-κB在大鼠肺内主要表达于气道上皮细胞、气道平滑肌细胞和血管内皮细胞。NF-κB在哮喘组的表达（134.15±9.42）显著高于对照组（102.51±6.77）,P＜0.05;干预组大鼠肺内的表达（110.65±8.71）明显低于哮喘组大鼠,P＜0.05。3.4相关性分析:哮喘组大鼠肺内b-FGF与NF-κB的表达呈正相关（r=0.531,P＜0.05）。哮喘大鼠肺内b-FGF与NF-κB表达与气管上皮的厚度及平滑肌厚度呈正相关性(rb-FGF=0.574,rNF-κB=0.711,P＜0.05),与气道上皮厚度呈正相关性(rb-FGF=0.601,rNF-κB=0.730,P＜0.05)。结论1.碱性成纤维细胞生长因子和核因子-κB参与支气管哮喘气道重塑过程,并在哮喘气道重塑过程可能具有协同作用。2.布地奈德可通过降低碱性成纤维细胞生长因子和核因子-κB在哮喘大鼠模型肺内的表达而改善气道重塑。
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