杂交油菜品种纯度聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定方法的研究

论文摘要

本研究在前人关于作物种子纯度鉴定研究的基础上,研究了酯酶同工酶电泳、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、醋酸-PAGE、乳酸-PAGE、甲酸-PAGE等电泳方法对杂交油菜种子纯度鉴定的影响,并进行了品种真实性和种子纯度的验证性试验和扫描电镜分析。主要研究结果如下:1.选用不同油菜品种、油菜杂交种及其亲本,培育不同发育时期幼苗（萌发0d,1d,3d,5d,7d）,提取酯酶同工酶,进行电泳。由电泳图谱观察发现,3d-5d芽龄的幼苗是利用酯酶同工酶电泳鉴定品种真实性和种子纯度的最适宜时期。2.研究了碱性电泳缓冲系统在杂交油菜品种真实性及种子纯度鉴定中的应用。分析了油菜清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白等四类蛋白质的SDS-PAGE电泳图谱,探索适合杂交油菜种品种鉴定的蛋白质电泳系统;分析了分离胶浓度,浓缩胶浓度,离子强度,电极缓冲液浓度等对电泳效果的影响;经多次试验分析,本试验选择分离胶浓度10%,浓缩胶浓度3%,碱性电极缓冲液pH8.3的组合进行蛋白质电泳,此组合电泳图谱较为清晰,效果较好。应用上述方法对8个杂交油菜组合的干种子进行了分析。结果表明,四类主要蛋白质在品种间均存在不同程度的谱带差异,均可较好区分不同的杂交油菜品种,其中碱性体系谷蛋白的多态性较强,图谱清晰度较高,鉴定杂交油菜品种真实性和种子纯度的效果更好。3.利用醋酸-PAGE、乳酸-PAGE、甲酸-PAGE三种酸性电泳缓冲系统,油菜清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白等四类蛋白电泳对杂交油菜品种真实性和种子纯度进行鉴定。结果表明,多数酸性电泳缓冲系统的酶谱效果较差,但在醋酸-PAGE缓冲系统条件下,清蛋白多态性较强,鉴定杂交油菜品种的效果相对较好。酸性电泳缓冲系统虽然比较稳定,但其酶谱效果明显不如碱性体系的蛋白质电泳。4.为了探讨室内谷蛋白SDS-PAGE电泳检测与田间纯度的关系,选择8个杂交油菜品种,通过田间种植试验与实验室杂交种种子纯度谷蛋白的SDS-PAGE电泳检测验证性试验结果进行相关分析。结果表明,田检纯度和蛋白质电泳图谱纯度呈极显著正相关r=0.8587（r2=0.7373）,建立了田间纯度依谷蛋白SDS-PAGE电泳谱带纯度的回归方程:Y=0.6988X+28.992。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 油菜种子纯度鉴定的重要性
• 1.2 油菜种子纯度鉴定技术的研究进展
• 1.2.1 常规鉴定法
• 1.2.2 物理化学鉴定
• 1.2.3 电泳法
• 1.2.4 分子标记技术
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 供试材料
• 3.2 主要试验药品与仪器
• 3.2.1 试验药品
• 3.2.2 仪器
• 3.3 杂交油菜酯酶同工酶电泳技术实验
• 3.3.1 试剂配置方法与样品配置
• 3.3.2 样品制备
• 3.3.3 分离胶与浓缩胶组成和制备
• 3.3.4 酯酶同工酶电泳
• 3.3.5 染色、观察并记录
• 3.4 杂交油菜蛋白质SDS—PAGE电泳方法实验
• 3.4.1 试剂配置方法与样品配置
• 3.4.2 样品提取
• 3.4.3 分离胶和浓缩胶的配置
• 3.4.4 蛋白质SDS-PAGE电泳
• 3.4.5 固定和染色
• 3.4.6 将电泳图谱转化为0,1标记
• 3.5 杂交油菜种子Acid-PAGE电泳方法实验
• 3.5.1 蛋白质样品的提取
• 3.5.2 蛋白质Acid-PAGE电泳
• 3.5.3 固定和染色
• 3.5.4 杂交油菜种子甲酸-PAGE电泳方法实验
• 3.5.5 杂交油菜种子醋酸-PAGE电泳方法实验
• 3.5.6 杂交油菜种子乳酸-PAGE电泳方法实验
• 3.6 杂交油菜种子纯度鉴定
• 3.7 扫描电镜试验
• 4 结果与分析
• 4.1 杂交油菜酯酶同工酶电泳
• 4.1.1 油菜各组合幼苗酯酶同工酶萌发0d酶谱分析
• 4.1.2 油菜各组合幼苗酯酶同工酶萌发1d酶谱分析
• 4.1.3 油菜各组合幼苗酯酶同工酶萌发3d酶谱分析
• 4.1.4 油菜各组合幼苗酯酶同工酶萌发5d酶谱分析
• 4.1.5 油菜各组合幼苗酯酶同工酶萌发7d酶谱分析
• 4.2 杂交油菜种子贮藏蛋白SDS-PAGE电泳
• 4.2.1 供试品种的谷蛋白电泳图谱分析
• 4.2.2 供试品种的球蛋白电泳图谱分析
• 4.2.3 供试品种的清蛋白电泳图谱分析
• 4.2.4 供试品种的醇溶蛋白电泳图谱分析
• 4.3 杂交油菜种子贮藏蛋白Acid-PAGE电泳
• 4.3.1 供试品种甲酸-PAGE电泳图谱分析
• 4.3.2 供试品种醋酸-PAGE电泳图谱分析
• 4.3.3 供试品种乳酸-PAGE电泳图谱分析
• 4.4 杂交油菜种子纯度鉴定试验结果分析
• 4.5 种皮扫描电镜结果分析
• 5 讨论
• 5.1 酯酶同工酶电泳效果
• 5.2 关于杂交油菜种SDS-PAGE电泳效果
• 5.3 关于杂交油菜种Acid-PAGE电泳效果
• 5.4 关于电泳试验过程中应注意的问题
• 6 结论
• 7 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 发表论文