我国不同地域牦牛β-乳球蛋白5’调控区同源性分析

论文摘要

遗传多样性是生物多样性的重要组成部分,是生态系统多样性、物种多样性和维持物种长期存在的基础。本研究参考相关文献设计引物,寡聚核苷酸序列为,上游引物:5′-gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC -3′,下游引物:5′-gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT -3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后分别克隆了来自我国青海、云南和甘肃地区牦牛乳球蛋白基因的5′调控区1447bp的DNA片段,将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆在pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明青海牦牛β-乳球蛋白5′调控区序列与奶牛的序列相比有34个碱基的差异,核苷酸序列同源性为97.65%,其中明显的差异表现在一个位点连续三个碱基的缺失突变和一个位点一个碱基的插入突变。云南牦牛乳球蛋白基因5′调控区序列与奶牛的序列相比有38个碱基的差异,两者之间的同源性为97.3%。其中也包含有一个位点连续三个碱基的缺失突变和一个位点一个碱基的插入突变。青海牦牛和云南牦牛乳球蛋白基因相比,有8个碱基的差异,两者之间的同源性为99.4%。

论文目录

• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 遗传多样性的概念
• 1.1 含义
• 1.2 研究遗传多样性的意义
• 1.3 两种假说的建立
• 2 遗传多样性的研究方法
• 2.1 形态学标记
• 2.2 染色体标记
• 2.3 生化标记
• 2.4 分子标记
• 2.4.1 基于Southern 杂交技术的分子标记
• 2.4.2 基于PCR（Polymerase Chain Reaction ） 的分子标记
• 2.4.3 扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP）
• 2.4.4 重复顺序标记
• 3 乳腺生物反应器和β-乳球蛋白
• 第二章 实验材料和方法
• 1 实验材料
• 1.1 样品采集
• 1.2 主要仪器设备
• 1.3 菌株及酶类
• 1.4 培养基的配置
• 1.5 试剂的配置
• 2 实验方法
• 2.1 牦牛基因组总DNA 的提取
• 2.2 牦牛β-乳球蛋白基因5′调控成分的PCR 扩增
• 2.2.1 PCR 反应体系
• 2.2.2 PCR 循环程序
• 2.2.3 琼脂糖凝胶的制备
• 2.2.4 PCR 产物的检测
• 2.3 目的片段的回收
• 2.4 纯化的PCR 扩增片断的克隆
• 2.4.1 克隆用载体
• 2.4.2 PCR 纯化回收和载体的连接
• 2.4.3 感受态细胞的制备和转化
• 2.4.4 质粒DNA 的小量制备
• 2.4.5 质粒DNA 的酶切鉴定
• 2.5 DNA 的序列测定
• 2.5.1 穿刺培养
• 第三章 结果和分析
• 1 基因组总DNA 提取结果
• 2 PCR 扩增结果
• 3 重组质粒酶切结果
• 4 重组质粒测序结果与分析
• 第四章 讨论
• 1 高质量基因组DNA 的提取
• 2 PCR 扩增
• 2.1 引物的设计和合成
• 2.2 PCR 扩增的影响因素
• 3 电泳
• 4 连接反应
• 5 酶切鉴定
• 6 同源性分析
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢