论文摘要
滞育（Diapause）是昆虫及其近缘节肢动物在特定发育期发育停滞,不食不动,新陈代谢降低的一个生命现象。也是昆虫长期适应不良自然环境而获得的一种生存本领。它能使昆虫度过酷暑,严寒以及不适应的环境。昆虫滞育主要受光周期和温度的影响。一般长日照和高温诱导昆虫进入夏滞育,短日照和低温诱导昆虫进入冬滞育。葱蝇Delia antiqua（Meigen）,属双翅目（Diptera）、花蝇科（Anthomyiidae）、地种蝇属（Delia）昆虫,是世界性的地下害虫,对百合科蔬菜的产量和质量影响极大。属兼性滞育,有冬季滞育和夏季滞育两种方式,以蛹在同一发育阶段进人滞育。至今为止,对昆虫夏滞育的研究很少,更没有对夏滞育和非滞育的系统比较研究,且对滞育的研究多在分子水平进行。但是,基因是遗传信息的载体,而生命活动的执行者却是基因的表达产物——蛋白质。基因组是静态的,而蛋白质组是动态的。蛋白质有其自身特有的活动规律,如蛋白质的修饰加工、转运定位、结构形成、代谢等,这些均无法从基因组水平上的研究而获知。因此,要对复杂的生命活动有全面的认识,必然要在蛋白质水平上对生物体进行深入的研究。对葱蝇蛹的比较蛋白质组学研究,为全面了解滞育的分子机制提供更有价值的信息。本研究初步建立了葱蝇滞育蛹的双向电泳体系,并对葱蝇非滞育和夏滞育蛹进行了比较分析和质谱鉴定尝试。主要结果如下:本实验对葱蝇滞育蛹分别采用裂解,高速离心和TCA沉淀法这两种不同的蛋白提取方法,结果发现,采用加液氮研磨加裂解液,后高速离心的方法比采用TCA沉淀的方法更为合适,蛋白损失少,图谱较均匀清晰。通过优化改进各种条件,初步建立了葱蝇滞育蛹的双向电泳体系后,对葱蝇非滞育和夏滞育蛹进行了比较蛋白质组学分析。采用7cm,pH3-10胶条和12%SDS-PAGE所获得的双向电泳图谱背景较低,通过图像扫描和软件分析可以明显检测到超过230个蛋白点。在非滞育和夏滞育葱蝇蛹期分别有1个点和5个蛋白点特异表达,而有7个点在非滞育和夏滞育存在表达量上的差异。针对非滞育蛹和夏滞育蛹一些较为明显的差异蛋白点,对这些差异点采用MALDI-TOF MS型质谱设备对其进行了分析,并结合MASCOT在线检索系统进行比对。