论文摘要
目前针对慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染尚无切实有效的办法,以诱导机体产生细胞免疫为主的HCV治疗新疫苗,可通过重建感染者针对HCV的免疫应答,调动自身的免疫机能来清除病毒,减少非特异性炎症对肝脏的损害的作用。有可能是将来治疗慢性HCV感染的重要方法。本研究的课题是建立在我室长期对中国人群常见的HCV感染毒株（1b、2a）包膜蛋白E2高变区1（HVR1）序列变异规律的研究基础上,根据保守位点合成的一系列长度不等的HCVHVR1模拟表位。之前的研究中,已经验证了其中一个含有7个氨基酸的多肽（7P）能够诱导小鼠免疫应答。本课题主要是在此基础上,针对人不同免疫细胞,研究7P对人不同免疫细胞分泌细胞因子的影响,并初步探讨其机制。课题共分为三个部分。（一）7P对正常人免疫细胞分泌细胞因子的影响将7P与正常人的外周血单核细胞(（PBMCs）共同孵育培养,然后通过检测免疫细胞内细胞因子分泌的改变来研究其免疫变化。结果表明,应用7P刺激正常人PBMCs后,分泌IFN-γ的细胞频数无论在NK细胞、NKT细胞以及CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴细胞均明显增高;而分泌IL-4的细胞频数则变化不明显。分泌IL-10的细胞频数在CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴细胞表现为升高,在NK细胞、NKT细胞表现为下降;而分泌TNF-α的细胞频数在CD4+CD8-、CD4-CDS+T淋巴细胞表现为下降,在NK细胞、NKT细胞表现为升高。（二）7P刺激免疫细胞分泌细胞因子改变的初步研究首先将7P与正常人的外周血单核细胞(（PBMCs）共同孵育培养,然后检测抗原呈递细胞（DC）成熟及细胞因子变化情况。结果表明应用7P刺激DC细胞时,成熟细胞表型的mDC细胞的频数明显下降;成熟的细胞表型的pDC细胞的频数未发生变化,代表mDC分泌功能的IL-12未能检测出来。提示7P体外刺激有可能够降低成熟mDC的表达,未能促进IL-12的分泌;但对pDC表达的影响尚不完全明确。其后采用细胞分选技术,将抗原提呈细胞从PBMCs中分离出去,剩余的成分中包括免疫反应的效应细胞T细胞和NK、NKT细胞,将其和7P共同孵育培养后检测细胞内细胞因子染色。结果表明,当应用磁珠分选之后其与7P共同孵育培养,能够得到与分选之前基本相同的结果。提示7P的这种对细胞因子分泌的调节可能是直接作用于效应细胞,同时对于抗原提呈细胞（DC）也具有直接或间接的作用,而这种作用也可能间接地影响效应细胞的细胞因子分泌。（三）7P对HCV感染患者免疫细胞分泌细胞因子影响的初步研究将HCV感染患者的PBMCs和7P共同孵育培养后检测细胞内细胞因子染色,来分析7P对HCV感染患者的免疫细胞的作用。与第一部分结果相比,INF-γ在NK及NKT细胞,IL-10在CD4+CD8-T细胞及CD4-CD8+T细胞的变化是一致的;而TNF-α在NKT细胞出现了相反的变化,即下降。同时,我们也注意到其他未发生具有统计学意义变化的部分,其变化的主要方向也往往和之前的实验结果趋向一致。