不同病程乙型肝炎患者PBMC中T细胞亚群的研究

论文摘要

目的 本文采用一种新型亲和免疫组织化学染色技术—生物素-链酶亲和素（Biotin-Streptavidin,BSA）系统,检测188份各型乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）中T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD+（25）+）的百分比,以期进一步探讨乙型病毒性肝炎的发病机制,T淋巴细胞亚群表达水平变化在乙型肝炎中的意义,及BSA技术在T细胞亚群测定方面的临床应用价值。 方法 采用聚蔗糖—泛影葡胺（Ficoll）分离液密度梯度离心法直接从新鲜肝素抗凝血中分离PBMC,以含有10%小牛血清的RPMI-1640培养液重悬PBMC,并调整其浓度为大约2×106/ml,取10μl,以BSA法测定T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD25+)的百分比。另取0.5ml置24孔培养板,用植物血凝素（PHA）作为刺激原,加0.5ml PRMI-1640完全培养液,于37℃含5%的CO2培养箱孵育培养48h,收集细胞,调成浓度约为2×106/ml,再用BSA法测定CD25+的浓度。再以PCR法测定PBMC内HBV DNA的感染率。 结果 实验结果显示:与正常对照相比,乙肝病人PBMC中T淋巴细胞亚群表达水平CD3+、CD4+降低,CD8+升高,CD4+/CD8+比值降低,CD25表达水平在PHA诱导前后均降低,差异有显著意义（P<0.01）;另外,乙肝病人PBMC中HBV-DNA（+）病人与PBMC内HBV-DNA（-）病人相比,CD25表达水平亦存在较大差异（P<0.01）。 结论 乙肝病人体内存在明显的细胞免疫功能紊乱,表现为T细胞亚群的表达水平降低及其比例失衡,T细胞活化障碍,并与肝病的慢性化相关;BSA也是一种测定T细胞亚群的简便易行而有效的方法。

论文目录

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• 3⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₂₅⁺)及其检测方法的研究进展'>第一部分 乙肝患者外周血单个核细胞（PBMC）中T细胞亚群(CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₂₅⁺)及其检测方法的研究进展
• 3⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₂₅₊⁺)的测定'>第二部分 PBMC的培养及其T细胞亚群(CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₂₅₊⁺)的测定
• 0 引言
• 1 材料
• 1.1 病例与标本
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 方法
• 2.1 PBMC的分离
• 2.2 PBMC的培养
• 3⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₂₅⁺)'>2.3 BSA法测定PBMC中T淋巴细胞亚群(CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₂₅⁺)
• 2.4 PCR法测定PBMC内HBV DNA
• 3 结果
• 4 讨论与结论
• 参考文献
• 附录一
• 附录二
• 个人简历
• 发表论文
• 致谢