论文摘要
第一部分大鼠原位左肺移植模型的建立和改进【目的】建立并改进大鼠原位左肺移植动物模型【方法】清洁级健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠100只,体重200-250g。气管插管呼吸机支持下,经肺动脉灌洗LPD液后获取左肺,套管完成后保存于LPD液中备用。受体的手术采取不断肌肉的侧胸切口,肺门结构的游离采取钝性分离。肺门三结构的吻合采用套管法套入。【结果】所有的供肺套管均顺利完成,移植手术成功45例,失败5例,成功率90%。供肺获取及套管时间25±2min,吻合时间30±4min。失败的原因:3例肺静脉套管失败,1例肺动脉套管失败,另一例为术中大出血休克死亡。【结论】成功建立并改进了大鼠原位左肺移植的动物模型。该动物模型容易复制,成功率高,有进一步推广的价值。第二部分供肺保存过程中细胞死亡类型的动态变化【目的】研究供肺保存过程中细胞死亡类型的动态变化【方法】清洁级健康雄性SD大鼠42只,体重200-250g。分为7组,每组6只。气管插管呼吸机支持下,经肺动脉灌洗LPD液后整体获取心肺。将心肺整体取出后立即置于4℃新鲜制备的LPD液中保存一定的时间（0,2,4,6,12,18,24小时）。在不同的供肺保存时间点上,经主肺动脉向供肺内灌注台盼蓝进行染色并固定。蜡块上同时进行TUNEL和Hoechst染色。在荧光显微镜下观察,严格按照盲法由两位研究者对死亡细胞进行分类计数。【结果】随着供肺保存时间的延长,细胞逐渐出现死亡。在早期,细胞死亡以凋亡为主,在供肺保存12小时左右细胞的凋亡达到最高峰,占所有细胞的9.17±2.17%。此后细胞凋亡逐渐下降,在供肺保存18小时组基本消失,整个变化呈现钟形曲线;而细胞的坏死始于供肺保存4小时组,以后逐渐上升,至供肺保存24小时组达到最高峰33.0±2.87%,整个变化呈现向上的抛物线型。【结论】在供肺的保存过程中,肺实质细胞的死亡在供肺保存的早期以凋亡为主,后期以坏死为主。细胞的坏死是随着供肺保存时间的延长而逐渐增加的。第三部分供肺保存及移植肺TLR4信号系统的激活【目的】通过对供肺保存和肺移植两阶段的Toll-like receptor 4（TLR4）及其下游炎症因子的表达的检测,探讨TLR4与肺移植后缺血再灌注损伤的关系。【方法】清洁级健康雄性SD大鼠42只,体重200-250g。分为7组,每组6只。供肺的获取和保存同前一部分。将心肺整体取出后立即置于4℃的新鲜制备的LPD溶液（100ml LPD液中加入0.7ml 1%碳酸氢钠溶液将其PH值调整到7.40）中保存。在不同的供肺保存时间点上（0、2、6、8、12、18、24h）,Western blot方法检测供肺的TLR4蛋白表达水平,RT-PCR方法检测其下游因子TNF-α和iNOS的表达水平。另取SD大鼠42只,体重250-300g。分为7组,每组6只。供肺的获取和保存同前一部分。在不同的供肺保存时间（0、2、6、8、12h）后,在改良的模型上行左肺原位移植术。移植术后30 min,Western blot方法检测供肺的TLR4蛋白表达水平,RT-PCR方法检测其下游因子TNF-α和iNOS的表达水平。对供肺保存过程中的细胞坏死的变化和YLR4的表达做相关性分析。【结果】供肺保存过程中TLR4表达随着保存时间的推移逐渐的增加,在供肺保存24小时达到最高.其动态变化和细胞坏死规律一致。供肺保存过程中的细胞坏死和TLR4的表达密切的相关（r=0.874,P＜0.01）。不同保存时间点的供肺炎症因子（TNF-α和iNOS）的表达逐渐升高,与其相应的TLR4表达水平呈现正相关（TNF-α,r=0.779,P＜0.01;iNOS,r=0.769,P＜0.0 1）。肺移植后TLR4及其炎症因子TNF-α、iNOS的表达与相应保存时间的供肺相比显著增加,其表达量随着供肺保存时间的延长而逐渐增加。肺移植后30 min的TLR4表达水平与炎症因子TNF-α和iNOS的表达密切相关（TNF-α:r=0.617,P＜0.05;iNOS;r=0.460,P＜0.05）。【结论】大鼠供肺的保存过程中存在TLR4及其下游炎症因子的的活化,呈时间依赖性,其变化趋势与供肺保存过程中发生的细胞坏死的情况相一致。肺移植后,移植肺TLR4及其下游炎症因子的表达与肺保存期相比显著增加,且与供肺保存时间的长短密切相关。第四部分PDTC干预对移植肺TLR4信号系统表达和肺功能的影响【目的】通过吡咯二硫氨基甲酸酯（Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）阻断TLR4的下游炎症因子的释放,从分子水平、组织水平和移植肺功能评估等方面来考察TLR4信号系统的阻断在大鼠的缺血再灌注损伤中是否具有保护作用。【方法】SD雄性大鼠30对,体重在200-300g之间。分为两组,对照组和PDTC干预组。每个组又按供肺的保存时间分为0h、2h、6h、8h和12h共5个亚组。每个亚组行六次成功的肺移植实验,收集实验标本。对照组供肺保存于LPD液中,实验组的保存液中加入PDTC（Sigma公司,40mmol/L）。移植术后30 min,Western blot方法检测两组供肺的TLR4蛋白和P50表达水平,EMSA方法检测NF-κB入核的变化。RT-PCR方法检测其下游因子TNF-α和iNOS的表达水平。同时比较两组气道压力、血气分析氧和指数、湿干重比、HE染色、透射电镜等肺功能指标。【结果】PDTC干预组和对照组相比,TLR4和P50的表达统计学检验均无显著差异（TLR4-p=0.66 1,p＞0.05;P50:p=0.276,p＞0.05）。PDTC干预组和对照组相比,NF-κB入核明显的减少,其差别统计检验有显著意义（P=0.000,P＜0.01）;,TNF-α和iNOS表达统计学检验有显著差异（P=0.000,P值均＜0.01）。PDTC干预组与对照组相比较,移植肺的NF-κB入核减少和TLR4下游的炎症因子TNF-α、iNOS表达上的变化密切相关（TNF-α:r=0.636,P＜0.01;iNOS:r=0.633,P＜0.01）。观察移植肺功能,PDTC干预组和对照组相比,肺移植后30 min气道峰压差（P=0.038,P＜0.05）、血气分析氧合指数（P=0.042,P＜0.05）、湿干重比（P=0.001,P＜0.05）、移植肺的肺损伤评分（P=0.017,P＜0.05）,统计学检验均有显著差异。【结论】PDTC预处理不能降低移植肺的TLR4的表达,但是可以阻断TLR4信号系统下游炎症因子的释放。其机制可能通过阻断NF-κB的入核来实现的,而非下调NF-κB的表达量。细胞因子水平的下降与术后的移植肺功能的改善明显相关。因此,PDTC预处理能明显改善移植肺的功能。
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- [1].The Effects of PDTC plus Leflunomide and Cyclosporine on the NF-КB Signaling Pathway in Mouse-to-rat Cardiac Xenografts[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2009(02)
- [2].Combination of PDTC and GBE Could Better Alleviate the Damage to Ha Ca T Cells Caused by UVB[J]. Biomedical and Environmental Sciences 2019(10)
- [3].PDTC对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响[J]. 中国麻风皮肤病杂志 2012(03)
- [4].PDTC对大鼠放射性肺损伤的保护作用及其机制[J]. 山东医药 2017(32)
- [5].PDTC联合依达拉奉干预下血管性痴呆大鼠脑内MCP-1的相关变化研究[J]. 中国实验诊断学 2016(08)
- [6].PDTC和姜黄素对抗β_2GPI抗体诱导小鼠表达组织因子的影响[J]. 中国免疫学杂志 2017(06)
- [7].PDTC抑制大鼠骨关节炎一氧化氮表达的实验研究[J]. 中国中医骨伤科杂志 2008(11)
- [8].核因子κB抑制剂PDTC对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用[J]. 临床和实验医学杂志 2020(04)
- [9].The Effects of PDTC on Interleukin-1β-induced Nitric Oxide Production in Chondrocytes[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2009(03)
- [10].核转录因子-κB抑制剂PDTC对幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究[J]. 福建医药杂志 2011(05)
- [11].PDTC对实验性重症急性胰腺炎肺损伤的保护作用[J]. 中国医疗前沿 2012(15)
- [12].核因子-κB抑制剂PDTC在肺动脉高压中的作用[J]. 山东大学学报(医学版) 2009(11)
- [13].PDTC对肝纤维化大鼠核转录因子-κB、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原表达影响研究[J]. 免疫学杂志 2013(03)
- [14].创伤性脑损伤脑组织NF-kB表达变化规律及PDTC对其影响[J]. 四川医学 2013(02)
- [15].Effect of NF-κB Inhibitor PDTC on a Herpetic Stromal Keratitis Mouse Model[J]. Eye Science 2012(04)
- [16].PDTC通过抑制NF-κB途径增强A549细胞对顺铂的敏感性[J]. 临床肺科杂志 2018(11)
- [17].大强度力竭运动和PDTC干预对大鼠关节软骨损伤的影响及NF-κB信号途径的探讨[J]. 体育学刊 2014(01)
- [18].抗氧化剂PDTC对卡铂诱导宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响[J]. 肿瘤 2010(11)
- [19].Role of Δ133p53 isoform in NF-κB inhibitor PDTC-mediated growth inhibition of MKN45 gastric cancer cells[J]. World Journal of Gastroenterology 2017(15)
- [20].二苯乙烯苷联合PDTC抗H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡[J]. 中国实验方剂学杂志 2013(08)
- [21].PDTC对喉癌裸鼠模型中循环肿瘤细胞的影响[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2011(09)
- [22].PDTC抑制大鼠癫痫发作行为及脑内NF-κB表达[J]. 毒理学杂志 2012(02)
- [23].NF-κB抑制剂PDTC治疗大鼠子宫内膜异位症的实验研究[J]. 实用妇产科杂志 2010(11)
- [24].PDTC对高血压大鼠继发左心室肥厚及心力衰竭的作用[J]. 天津医药 2015(09)
- [25].PDTC合并泰素帝对裸鼠移植瘤抑制效应的研究[J]. 同济大学学报(医学版) 2014(03)
- [26].大鼠重症急性胰腺炎肺损伤中PDTC预处理对NF-κB表达及细胞凋亡的调节作用[J]. 解剖科学进展 2012(06)
- [27].PDTC对大鼠心肌梗死后NF-κB与MMP-2表达及心肌胶原重塑的影响[J]. 重庆医学 2013(25)
- [28].PDTC逆转K562/AO_2细胞多药耐药性机制研究[J]. 徐州医学院学报 2010(04)
- [29].PDTC对顺铂抑制胃癌细胞SGC-7901增殖的影响[J]. 潍坊医学院学报 2016(04)
- [30].感应电机驱动系统的新型PDTC设计[J]. 微电机 2020(09)
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