论文摘要
间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有很强的自我更新能力,并具有很高的可塑性,在组织工程及临床细胞治疗等方面具有广阔的应用前景,所以间充质干细胞已成为干细胞研究的热点,如何在体外培养过程中维持MSCs未分化状态已成为其中的核心问题之一。而到目前为止对调节MSCs生长和未分化状态的分子机理方面的研究甚少。因此为了进一步了解维持MSCs未分化状态的机制,本论文采用自行建立培养的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)克隆,应用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)结合半定量RT-PCR技术筛选和鉴定hBM-MSCs早期和晚期间差异表达的基因。本研究首先分离培养hBM-MSCs,再分别选取传代培养至第五代和第二十代的细胞作为实验方(tester)和驱动方(driver),进行抑制消减杂交,构建cDNA消减杂交文库。然后将消减杂交后的PCR产物克隆到pGEM-T easy载体中,随后挑取阳性克隆进行测序,并与GenBank人基因库中已公布的核酸序列进行同源性比较分析。结果表明挑取的117个克隆分别代表21个已知的人基因,同源性都达到90%以上,这些基因分别具有不同的生物学功能。为进一步确定消减杂交的结果,进行半定量RT-PCR分析,结果发现21个基因中有6个基因在早期hBM-MSCs中的表达量都是晚期中表达量的2倍以上,它们分别是rab23,ddx21 ,tnfaip3 ,nomo2 ,pabpc3及cnn3,这些基因可能对维持hBM-MSCs的未分化状态和调节早期hBM-MSCs的生长具有重要作用。本研究将为这些基因的进一步功能研究以及阐明维持hBM-MSCs未分化状态的机制打下基础,而且有助于改变和控制hBM-MSCs的生长和分化的研究,进一步推动hBM-MSCs在组织工程上的应用。
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标签:人骨髓间充质干细胞论文; 抑制消减杂交论文; 基因表达论文;