FUT1/FUT4表达下调对A431肿瘤细胞荷瘤小鼠的血管新生的抑制作用

论文摘要

Lewis Y（LeY）寡糖抗原在多数上皮来源的肿瘤细胞中高表达,而且与肿瘤细胞的生长,转移及浸润密切相关。LeY寡糖抗原在肿瘤发生的早期和转移阶段可作为一个抗肿瘤靶点来进行研究。研究表明,封闭LeY寡糖抗原的功能可提供一种新型的肿瘤治疗方法。岩藻糖基转移酶（ Fucosyltransferases,FUTs）是一类催化岩藻糖基化寡糖合成的酶类,其中FUT1/FUT4是合成LeY寡糖抗原的关键酶,对这两种酶的调控可影响该寡糖的合成。本实验室前期工作中利用RNA干扰（RNAi）技术,构建FUT1/FUT4基因的干涉质粒（FUT1/FUT4 siRNA）,通过抑制FUT1/FUT4基因的表达,降低LeY寡糖抗原的合成,利用细胞培养和建立A431肿瘤细胞荷瘤小鼠模型,通过体内、体外实验,证明:通过注射FUT1/FUT4 siRNA可抑制肿瘤细胞的增殖。为进一步探讨siRNA在肿瘤增殖中的分子作用机制,本论文研究LeY寡糖抗原与肿瘤血管新生的相关性。血管内皮生长因子（VEGF）是促进实体瘤血管发生和血管新生的重要因子之一,而肿瘤组织的微血管密度（microvessel density, MVD）是反映实体瘤增殖能力的客观指标。因此本实验选用VEGF和MVD来评价肿瘤血管新生。本研究采用荷瘤小鼠模型的肿瘤组织,通过RT-PCR、Western blot及间接免疫荧光检测方法,检测注射FUT1/FUT4 siRNA后对肿瘤组织中FUT1/FUT4基因和LeY寡糖抗原表达的情况;通过Western blot和免疫组织化学方法,检测肿瘤组织中VEGF的表达;通过CD34免疫组化染色,观察肿瘤组织中血管新生情况,分析肿瘤组织中MVD值的变化。实验结果表明:重组FUT1/FUT4干涉质粒可抑制肿瘤组织中VEGF的表达,减少肿瘤血管新生,并且是通过降低肿瘤组织中特异的FUT1/FUT4的表达而下调LeY寡糖抗原的合成而发挥作用的。通过对荷瘤小鼠模型中肿瘤组织的研究,重组FUT1/FUT4干涉质粒可抑制肿瘤组织的血管新生,从而为siRNA抑制肿瘤生长的机理提供新的实验基础。对岩藻糖基转移酶表达及调控的研究,不仅有助于研究寡糖在肿瘤增殖过程中的作用机制,并将为以糖抗原为作用靶点而进行肿瘤基因治疗,提供新的思路和手段。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢