苏云金杆菌HBF-1菌株对HD-1菌株增效作用的研究

论文摘要

本研究通过增效菌株的筛选获得了对HD-1菌株具有强增效作用的苏云金杆菌HBF-1菌株。HBF-1菌株属苏云金杆菌日本亚种（Bacillus thuringiensis serovar japonensis）,血清型为H23,对鞘翅目黄褐丽金龟、铜绿丽金龟幼虫具有高毒力,而对鳞翅目害虫无明显杀伤作用。筛选结果表明,HBF-1菌株对HD-1菌株的增效作用最强,其CTC值为236。 通过HBF-1菌株各组分按一定浓度与HD-1菌株的纯晶体或孢晶混合物混合对初孵棉铃虫进行生物测定,明确了对HD-1菌株具有增效作用的是HBF-1菌株的活芽孢及其含有芽孢萌发产生物质的发酵上清液。并且,供试虫种类不同,HBF-1菌株的活芽孢表现出最大增效作用的浓度也不同。 HBF-1菌株增效作用机制的初步研究表明: HBF-1活芽孢对鳞翅目幼虫无明显杀伤作用,在其中肠内不能够萌发,但可以直接影响其正常的生长发育,使幼虫前期体重增加,而后期发育迟缓、历期延长,成虫产卵量明显减少,下一代卵无法正常孵化发育。 通过光学显微镜观察发现,用含有HBF-1活芽孢的饲料饲喂棉铃虫幼虫,棉铃虫生长发育到2龄时,幼虫的中肠肠壁细胞与正常细胞无明显变化。可是,幼虫生长发育到2龄以后,中肠肠壁细胞发生了变化:幼虫3龄时,中肠肠壁的杯状细胞顶膜、坛状腔内和狭长颈内的微绒毛数量明显比正常杯状细胞少,有的部位微绒毛已经脱落;再生细胞比正常再生细胞增多;柱状细胞顶部膨胀,微绒毛排列不整齐,并且有的部位微绒毛脱落;中肠肠壁比正常的增厚。幼虫4龄时,破坏更加严重。 酶活的测定结果表明:初孵棉铃虫幼虫取食含有100μg/g HBF-1活芽孢的感染饲料4d后,幼虫体内的乙酰胆碱酯酶的活性与对照相比降低,然而,随着饲喂HBF-1活芽孢时间的延长、虫龄的增大,幼虫体内乙酰胆碱酯酶的活性比对照的活性增高。对于羧酸酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶,无论是低龄幼虫还是高龄幼虫,取食HBF-1活芽孢的幼虫体内的羧酸酯酶活性均比对照的活性增高,谷胱甘肽-S-转移酶的活性均比对照的活性降低。

论文目录

• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 供试昆虫
• 2.1.3 供试培养基
• 2.1.4 仪器与药品
• 2.2 方法
• 2.2.1 棉铃虫的饲养
• 2.2.2 小菜蛾的饲养
• 2.2.3 增效菌株的筛选
• 2.2.4 HBF-1菌株不同培养时期的上清液制备
• 2.2.5 孢晶混合物的制备
• 2.2.6 HBF-1菌株活芽孢、纯晶体的制备
• 2.2.7 HBF-1菌株灭活芽孢的制备
• 2.2.8 增效活性的生物学测定程序及方法
• 2.2.9 取食HBF-1菌株活芽孢的棉铃虫幼虫中肠组织病理变化
• 2.2.10 棉铃虫体内酶活性的测定
• 3 结果与分析
• 3.1 增效菌株筛选的结果与分析
• 3.2 HBF-1菌株培养物各组分对HD-1菌株杀虫效果的影响
• 3.2.1 HBF-1菌株培养物上清液对HD-1菌株杀虫效果的影响
• 3.2.2 HBF-1菌株培养物中的孢晶混合物、活芽孢、纯晶体对HD-1菌株杀虫效果的影响
• 3.2.3 HBF-1菌株活芽孢和死芽孢对HD-1菌株杀虫效果的影响
• 3.2.4 不同浓度的HBF-1活芽孢对HD-1菌株杀虫效果的影响
• 3.2.5 不同浓度的HBF-1活芽孢对棉铃虫致死时间的影响
• 3.3 HBF-1菌株活芽孢和死芽孢对棉铃虫及小菜蛾体重的影响
• 3.4 HBF-1菌株活芽孢对棉铃虫生长发育的影响
• 3.5 HBF-1菌株活芽孢对棉铃虫幼虫中肠组织病理变化的影响
• 3.6 HBF-1菌株活芽孢对棉铃虫体内酶活的影响
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 作者简介
• 致谢
• 录用证明
• 稿件录用证明