大黄炮制前后药性品质的差异表征

论文摘要

炮制是中医药的一大特色,炮制不仅能改变药性,也能影响其品质。但是如何客观有效地评价炮制前后中药药性品质的变化,这不仅是长期制约中药炮制学科发展的瓶颈,也一直是困扰中药质量分析的难题。本文以大黄为模式药物,主要采用生物效价检测手段,结合化学成分分析,综合考察大黄炮制前后的药性品质的变化。在此基础上,探索建立主要基于生物效价检测的大黄及其炮制品药性品质评价方法。主要研究结果如下:1.首次建立了基于复方地酚诺酯便秘小鼠动物模型的大黄生物效价检测方法。大黄道地药材在1200-5000U·kg-1剂量范围内与小鼠排便质量呈良好的线性关系,R＞0.98,可采用量反应平行线2,2’,2”法测定大黄不同炮制品的致泻效价。2.首次建立基于生物热动力学表征的大黄生物效价检测方法。大黄道地药材在0.64U-3.84U剂量范围内与生物热动力学参数lg（t2/p2）呈良好的线性关系,R＞0.98。可采用一剂量法（标准曲线法）法测定大黄不同炮制品的生物效价。3.采用生物效价检测方法和亚急性毒性试验、四膜虫生物热活性分析,较系统地考察了大黄炮制前后药性品质的生物效应差异。大黄炮制过后致泻效价明显降低,酒大黄降低19.98%,熟大黄降低62.90%,大黄炭降低91.49%。亚急性毒性试验表明生大黄和酒大黄的最大无毒剂量相当于人临床最大用量(30g·d-1)的76倍,经炮制后,可以明显提高最大无毒浓度,熟大黄和大黄炭最大无毒剂量为人临床最大用量的152倍。大黄不同炮制品对四膜虫均有不同程度的抑制生长作用,其抑制率分别为生大黄（50.59%）、酒大黄（46.20%）、熟大黄（32.31%）、大黄炭（21.28%）。表明大黄炮制具有一定的减毒作用。4.通过化学成分定性定量分析,初步阐释了大黄炮制前后药性品质改变的物质基础。大黄炮制过后,总蒽醌和鞣质含量不同程度降低,游离蒽醌和结合蒽醌的比例也发生改变,生大黄中为1∶9.8,酒大黄为1∶6.7,熟大黄为1∶2.4,大黄炭为1∶0.8;随炮制程度游离蒽醌的比例加大。5.采用判别分析,初步建立大黄及其不同炮制品的药性品质模式识别方法,并在此基础上提出了基于生物效价检测的大黄不同炮制品质量控制建议。以大黄不同炮制品的类别作为应变量,通过变量筛选得到由生物效价作为自变量建立的判别方程,正确率可以达到70.83%,提示生物效价可以作为评价大黄不同炮制品的药性品质差异的重要指标。以95%置信区间统计描述大黄不同炮制品的生物效价值波动范围,表明经过炮制后,大黄各炮制品的生物效价波动范围明显小于生大黄,品质趋于稳定和均一。但大黄不同炮制品在生物效价方面存在重叠区,亟待从生物效价角度建立大黄的炮制规范和标准。综上,本文初步建立可用于表征大黄及其不同炮制品药性品质差异的生物效价检测方法和指标,在此基础上建立了大黄不同炮制品药性品质差异的模式识别方法,为进一步阐明大黄炮制机理、科学建立大黄炮制工艺规范和多元质量控制标准提供了实验支持。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 1. 绪论
• 1.1 立题依据及意义
• 1.1.1 炮制对中药品质及药性改变的研究意义
• 1.1.2 现行中药品质与药性评价的研究现状
• 1.2 本课题研究思路的提出
• 1.2.1 品质与药性是辨证统一的关系
• 1.2.2 生物效价检测对中药品质与药性评价的借鉴意义
• 1.2.3 确定大黄为研究对象的依据和意义
• 1.3 关键技术问题
• 1.4 本课题的研究目标和内容
• 1.4.1 本课题的研究目标
• 1.4.2 本课题的研究方案和内容
• 2. 同批生大黄不同炮制品内在品质差异的理化分析
• 2.1 样品的采集及加工
• 2.2 样品的前处理与制备
• 2.2.1 大黄样品的前处理
• 2.2.2 大黄粉末的制备
• 2.2.3 大黄醇提样品的制备
• 2.3 大黄样品的理化分析
• 2.3.1 药典常规项目检测分析
• 2.3.2 化学多组分含量测定
• 2.3.3 UPLC快速指纹图谱分析
• 2.4 小结
• 3. 基于致泻效价检测的同批生大黄不同炮制品的药性品质差异表征
• 3.1 大黄生物效价检测方法的选择
• 3.2 大黄致泻效价测定方法的建立
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法及结果
• 3.2.3 结论与讨论
• 3.3 大黄致泻效价检测用的道地药材参照物质的制备与标定
• 3.4 大黄炮制品致泻效价的测定
• 3.4.1 试验设计
• 3.4.2 测定方法
• 3.4.3 测定结果
• 3.5 小结
• 4. 基于生物热动力学表征的同批生大黄不同炮制品的药性品质差异表征
• 4.1 生物热动力学用于生物效价检测的可行性分析
• 4.1.1 生物热动力学研究原理
• 4.1.2 生物热动力学测定的主要仪器及方法
• 4.1.3 生物热动力学检测的技术参数和特点
• 4.2 基于生物热动力学大黄生物效价检测方法的系统考察
• 4.2.1 生物热动力学特征参数信息的提取和分析处理
• 4.2.2 基于生物热动力学大黄生物效价检测方法实验条件的优化
• 4.2.3 大黄生物热动力学分析的方法学考察
• 4.3 大黄参照物生物热活性谱的确立
• 4.3.1 材料和仪器
• 4.3.2 实验方法
• 4.3.3 实验结果
• 4.4 基于生物热动力学表征的大黄生物效价检测
• 4.4.1 试验设计——一剂量法（标准曲线法）
• 4.4.2 大黄炮制品的效价测定
• 4.5 基于生物热动力学表达的大黄生物效价与致泻效价的相关性分析
• 4.6 小结
• 5. 同批生大黄不同炮制品的毒性差异研究
• 5.1 同批生大黄不同炮制品对昆明种小鼠的亚急性毒性比较研究
• 5.1.1 实验材料
• 5.1.2 实验方法
• 5.1.3 结果
• 5.1.4 结论与讨论
• 5.2 基于四膜虫生物热活性的同批生大黄不同炮制品毒性的比较
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 实验方法
• 5.2.3 实验结果
• 5.2.4 结论与讨论
• 5.3 小结
• 6. 大黄市售不同炮制品的药性品质差异表征
• 6.1 大黄市售不同炮制品的采集及理化分析
• 6.2 大黄市售不同炮制品的生物效价测定
• 6.3 大黄市售不同炮制品与自制同一批生大黄不同炮制品的比较分析
• 7. 大黄不同炮制品间药性品质差异的综合分析
• 7.1 同批生大黄的不同炮制品的药性品质改变规律的归纳
• 7.1.1 大黄炮制前后化学品质的改变
• 7.1.2 大黄炮制前后生物品质的改变
• 7.2 大黄不同炮制品间药性品质差异的多元综合分析
• 7.2.1 大黄不同炮制品化学组分含量与生物效价的相关关系研究
• 7.2.2 大黄不同炮制品的聚类分析
• 7.2.3 大黄不同炮制品的判别分析
• 7.2.4 基于生物效价检测的大黄不同炮制品质量控制建议的提出
• 8 结语与展望
• 8.1 主要研究结果及结论
• 8.2 问题与展望
• 参考文献
• 致谢
• 在校期间公开发表的学术论文、专著和科研成果