两面针药材抑菌“谱—效”的关系研究

论文摘要

我国中药历史悠久,功效显著,我国现行中药质量评价的通用模式是将已知的主要成分作为指标予以检测。这种模式只考虑了中药所含众多复杂成分中的个别成分,忽略了诸多成分间的协同作用和拮抗作用,因而难以客观有效地评价中药的内在质量,还使中药的掺伪造假有机可乘。于是,中药指纹图谱作为一种能较全面反映中药所含化学物质存在状态的质量评价模式应运而生,目前已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段,是能够为国内外广泛接受的一种中药质量评价模式。但当前中药指纹图谱技术所展示的还只是其中化学成分群的存在状态而已,尚不能阐述其与中药功效的相关性。要真正实现客观有效地评价中药质量,除对其中的化学成分用指纹图谱技术予以表达外,还须进一步开展指纹图谱与药效相关性的研究,从而建立一种能够通过测定中药色谱指纹图谱而预测其药效的质量评价新模式,即“谱-效”相关模式。目的：以芸香科植物两面针Zanthoxylum nitidum （Roxb.） DC.为研究对象,构建两面针药材的化学指纹图谱。以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌5种细菌为药效模型,进行药效学试验,获得两面针药材化学指纹图谱的量化特征和药效学数据。在此基础上,采用后退逐步回归统计学分析方法,寻找两面针药材“化学谱”—“药效”之间的对应关系。方法：1.两面针药材抑菌活性部位和提取工艺的筛选分别采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水4种溶剂对两面针药材进行提取,得到不同极性溶剂的提取物；有效部位即氯仿部位采用索氏提取法、超声提取法、回流提取法等工艺进行提取,得到不同工艺的提取物。采用微量稀释法,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌5种细菌为模型,对不同极性部位和不同工艺的提取物进行活性筛选,确定两面针药材的抑菌活性部位和提取工艺。并用纸片琼脂扩散法对43个两面针药材样品进行抑菌活性的测定,得到各样品对5种细菌的抑菌圈。2.建立两面针药材HPLC化学指纹图谱通过优化液相色谱条件,根据化学指纹图谱研究的要求,运用国家药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,建立并评价两面针药材抑菌活性部位的HPLC指纹图谱。3.构建两面针药材“谱-效”关系模型采用后退逐步回归统计学分析方法,将两面针药材HPLC指纹图谱的峰面积进行量化,与纸片琼脂扩散法测得的两面针药材抑菌活性结果结合,构建两面针药材抑菌“化学谱”—“药效”关系。结果：1.氯仿提取部位为两面针药材抑菌作用较好的活性部位,该部位含有氯化两面针碱等生物碱类成分。样品溶液制备工艺为氯仿直接回流法。样品的抑菌活性由高到低排列为：广西扶绥县2>广西大新硕龙>广西那坡县>广西钦州那丽镇>对照药材1>广西崇左。2.建立的两面针药材HPLC指纹图谱相似度大多数达到0.9左右,其中的24个指纹峰包括氯化两面针碱、白屈菜红碱等成分。所建立的HPLC指纹图谱也能很好的区分两面针药材与其非药用部位、伪品等,这有利于进一步规范两面针药材的质量标准。3.后退逐步回归法表明：两面针药材HPLC指纹图谱中的24个指纹峰中,有17个峰对金黄色葡萄球菌有作用,金黄色葡萄球菌的“谱—效”关系式为：Y=11.562-9.542X1+3.149X3-3.720X4+7.903X5-3.265X7-1.422X8 +1.929X10+1.919X11-1.614X12-1.143X13-3.969X14-1.438X15-3.036X16+3.412X20 +5.826X21+1.882X22+3.836X24（R2=0.921）；有17个峰对大肠埃希氏菌作用,大肠埃希氏菌“谱—效”关系式为：Y=11.074-5.969X1+2.102X2+2.809X3 +2.051X4+3.522X5一1.638X6-0.840X7-0.789X8-0.844X10+1.070X11-0.575X13-1.1 50X15-2.031X16-1.795X18+1.302X21-0.576X23+3.952X24（R2=0.914）；有13个峰对枯草芽孢杆菌有作用,枯草芽孢杆菌的“谱—效”关系式为：Y=12.397-8.362X1+2.211X3-2.200X4+2.656X5-2.516X8+1.421X9+1.347X11-2.5 52X16+2.946X18+1.366X19+2.311X20+3.835X21+3.119X24（R2=0.908）；有13个峰对伤寒沙门氏菌有作用,伤寒沙门氏菌的“谱—效”关系式为：Y=7.505-4.742X1-2.478X4+2.999X5+1.969X6+1.958X11-1.170X12-1.108X13-1.2 73X15+4.023X19+1.740X20+2.953X21+1.902X22+0.412X23（R2=0.936）;有17个峰对肺炎克雷伯氏菌有作用,肺炎克雷伯氏菌的“谱—效”关系式为：Y=11.103-8.016X1+1.177X3-1.717X4+3.849X5-1.183X7-1.355X8+1.525X10+1.206X11一1.217X12-0.623X13-1.435X14-1.612X16+1.556X19+2.235X20+4.794X21+1. 162X22+2.910X24（R2=0.919）。10个两面针药材样品的验证结果表明所得的“谱—效”关系式计算值与实际值十分接近。结论：1.不同产地、不同来源的两面针药材,其化学成分的不同,直接影响到了药效的差异。因此,传统的以单一或某几个化学成分对两面针药材的质量进行控制的方式并不能很好地反映药材的质量。2.通过对两面针药材药效部位的HPLC指纹图谱分析,不仅能较好的体现出两面针药材中氯化两面针碱、白屈菜红碱等活性成分,也可以对药材进行真伪的鉴别,以达到控制两面针药材品质和药效的目的。3.本研究所建立的“谱—效”关系式能够客观有效地评价两面针药材的内在质量,为两面针药材的使用提供依据。

论文目录

• 主要英文缩略语表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 两面针药材抑菌作用研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第二部分 两面针药材HPLC指纹图谱研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第三部分 两面针药材抑菌“谱-效”关系建模方法研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 全文总结
• 综述 中药体外抑菌研究的方法学进展（已发表）
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢