灵杆菌素分离纯化及其抑制肿瘤细胞增殖的研究

论文摘要

本文研究了粘质沙雷氏菌中灵杆菌素的提取方法,采用热酚水法提取灵杆菌素以及对提取出的脂多糖粗制品进行了纯化,并通过MTT法、电镜、PT-PCR和DNALadder、流式等方法对灵杆菌素的抗肿瘤增殖作用进行初步研究。发现灵杆菌素对结肠癌LS174t细胞有明显的抑制作用并呈浓度时间依赖关系;其诱导LS174t细胞出现典型的细胞凋亡超微结构改变;RT-PCR检测发现经不同浓度(5、10、25、50、100μg·ml-1)的灵杆菌素处理后细胞中bcl-2的表达下调,bax的表达上调;DNA电泳出现凋亡特有的“梯子”条带;流式细胞仪检测发现灵杆菌素可引起LS174t细胞凋亡并阻滞于S期。表明灵杆菌素能有效地通过诱导凋亡抑制LS174t细胞生长,其机制可能与抑制抗凋亡因子bcl-2的表达,增强凋亡因子bax的表达有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 粘质沙雷氏菌概述
• 1.2.1 粘质沙雷氏菌简介
• 1.2.2 粘质沙雷氏菌种属关系
• 1.2.3 粘质沙雷氏菌研究现状
• 1.3 内毒素简介
• 1.3.1 内毒素
• 1.3.2 细菌内毒素的研究进展
• 1.3.3 内毒素的生物学活性
• 1.3.4 内毒素与外毒素
• 1.3.5 脂多糖
• 1.3.6 脂多糖抗肿瘤方面的研究进展
• 1.3.7 灵杆菌素
• 1.4 本课题的目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验所需材料与设备
• 2.1.1 菌种来源
• 2.1.2 实验药品仪器
• 2.2 培养基的选择与菌种的培养
• 2.2.1 培养基的选择
• 2.2.2 菌种的培养
• 2.3 灵杆菌素提取
• 2.3.1 灵杆菌素的提取方法
• 2.3.2 本课题的提取方法
• 2.4 灵杆菌素纯化及鉴定
• 2.4.1 灵杆菌素纯化
• 2.4.2 灵杆菌素鉴定
• 2.5 肿瘤细胞来源及细胞培养
• 2.5.1 细胞系来源
• 2.5.2 细胞冻存、复苏和培养
• 2.6 显微镜下活细胞形态观察
• 2.7 四唑盐比色法（MTT法）测肿瘤增殖抑制
• 2.7.1 原理
• 2.7.2 实验步骤
• 2.8 电镜观察细胞超微结构的改变
• 2.8.1 原理
• 2.8.2 实验步骤
• 2.9 RT-PCR检测凋亡基因表达
• 2.9.1 原理
• 2.9.2 实验步骤
• 2.10 凋亡细胞的DNA裂解分析
• 2.10.1 原理
• 2.10.2 实验步骤
• 2.11 流式细胞仪检测细胞周期分布
• 2.11.1 原理
• 2.11.2 实验步骤
• 3 实验结果与分析
• 3.1 培养基选择与菌种培养
• 3.2 灵杆菌素纯化结果
• 3.3 显微镜下活细胞形态
• 3.4 四唑盐比色法（MTT法）测肿瘤增殖抑制
• 3.5 电镜观察细胞超微结构的改变
• 3.6 RT-PCR检测凋亡基因表达
• 3.7 凋亡细胞的DNA裂解分析
• 3.8 流式细胞仪检测细胞周期分布
• 3.9 本章小结
• 结论
• 讨论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢