论文摘要
目的体外模拟心肌环境,诱导骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）向心肌细胞分化,观察其诱导作用,同时与5-氮杂胞苷（5-azacytidine,5-aza）的诱导作用进行比较。方法自成年Wister大鼠的骨髓分离MSCs,新生Wister乳鼠分离心肌细胞并制备心肌细胞冻融液作为培养基体外模拟心肌环境,分四组培养MSCs。A组为对照组即用普通培养基培养细胞;B组为5-aza组;C组为心肌细胞冻融液与5-aza共同培养;D组为心肌细胞冻融液培养。观察细胞形态变化,利用免疫细胞化学技术鉴定心肌特异性蛋白T（Troponin T,cTnT）,连接蛋白43（Connexin43）,a一横纹肌动蛋白（a—Sarcomeric Actin）,CD31的表达情况。在光镜下随机选择8个非重叠视野,图像分析分别计算阳性细胞所占比例。数据采用SPSS13.0统计软件,测量数据以均数±标准差（ x±s）表示,作成组比较t检验。P<0.05有统计学意义。结果①体外模拟心肌微环境情况:培养7d时心肌细胞形成细胞簇或细胞单层,呈放射状排列的同心圆状或峰谷样生长,细胞簇搏动呈明显同步性。传代后的心肌细胞仍具有自主收缩的特性。②骨髓间充质干细胞的体外诱导结果:诱导处理1周后,5-氮杂胞苷组多数细胞呈杆状,紧密平行排列生长,细胞体积变大,可见肌丝样结构形成;心肌细胞冻融液组细胞有聚集生长趋势,形成大量的子细胞,可见大量的肌丝样的结构;5-氮杂胞苷+心肌细胞冻融液组脱落或降解的细胞数明显少于5-氮杂胞苷组,也形成肌丝样结构,但部分细胞内有脂肪空泡形成。③免疫细胞化学鉴定结果:诱导培养1周后,血清对照组仅表达α-横纹肌肌动蛋白;5-氮杂胞苷组表达心肌特异性蛋白T、α-横纹肌肌动蛋白、连接蛋白43,其阳性率分别为20%,28%,25%,抗CD31染色呈阴性;心肌细胞冻融液组上述蛋白表达阳性率分别为23%,32%,28%,明显高于5-氮杂胞苷组与5-氮杂胞苷+心肌细胞冻融液组（P<0.05）,同时抗CD31染色呈阳性;5-氮杂胞苷+心肌细胞冻融液组上述蛋白表达阳性率分别为21%,28%,24%,与5-氮杂胞苷组相比无明显差异（P>0.05）,同时抗CD31染色呈阳性结论①以心肌细胞冻融液体外模拟心肌微环境,可高效诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞。②部分骨髓间充质干细胞表达CD31,即可向血管内皮细胞分化,提示与5-氮杂胞苷单一的肌细胞诱导作用相比,心肌细胞冻融液更能提供一个心肌再生所需的自然条件。
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标签：骨髓间充质干细胞论文; 心肌细胞论文; 心肌微环境论文; 氮杂胞苷论文;